Mass Spectrometry Based Diagnostics for APRT Deficiency: A Validation of a UPLC-MS/MS Urinary Assay for Absolute Quantification of 2,8-dihydroxyadenine and Adenine

Adenín fosfóríbósýltransferasa (APRT) skortur er sjaldgæfur arfgengur efnaskiptasjúkdómur þar sem umbroti adeníns í líkamanum er raskað. Lífeðlisfræðilegum niðurbrotsleiðum sjúklings er raskað af skorti á ensíminu APRT sem hvatar niðurbrot adeníns yfir í Adenosín Mónófosfat (AMP). Fjarvera APRT ensímsins leiðir til niðurbrots adeníns yfir í 2,8-díhýdroxíadenín (DHA) af ensíminu Xanþín oxídasa. DHA er torleyst við sýrustig þvags sem veldur því að það fellur út í umfrymi nýrnanna og safnast þar fyrir, sem getur valdið nýrnaskaða, myndun nýrnasteina og í alvarlegum tilfellum bráðri nýrnabilun. Árið 2016 var þróuð aðferð til magngreiningar á DHA í þvagi með UPLC-QqQ-MS/MS mælingartæki með því að nýta samsætu efnisins í þekktum styrk sem innri staðal við mælingarnar, þó hefur gilding aðferðarinnar ekki enn verið framkvæmd að fullu. Tilgangur þessa verkefnis var að framkvæma gildingu á nýju ArcticMass aðferðinni með áherslu á stöðugleikamælingar fyrir DHA og Adenín í þvagi og í lausn. Gildingin var framkvæmd með tilliti til verklagsreglna um gildingar frá food and drug administration (FDA). Úrvinnsla gagnanna var síðan framkvæmd með forritunum Masslynx, Targetlynx og Microsoft Excel. Sértæknimælingin tókst vel, lægsti mælanlegi styrkur var lækkaður niður í 50 ng/ml. Áreiðanleiki, nákvæmni, smit, þynningar áreiðanleiki, matrixu áhrif og staðalkúrfutilraunir báru allar góðann árangur og staðfestu áreiðanleika mælingaraðferðarinnar á nýja mælitækinu. Nánast allar stöðugleikamælingar mættu stöðlum FDA og langtíma stöðugleikamælingar hafa verið undirbúnar.

Author dc:creator

• Þórður Hermannsson 1991-

Contributors dc:contributor

• Háskóli Íslands

• Lyfjafræði
• Efnaskiptasjúkdómar
• Arfgengi
• Erfðasjúkdómar
• Nýrnasjúkdómar
• Nýrnabilun
• Ensím
• Rannsóknir

Language dc:language.iso

en

Handle dc:identifier.uri

http://hdl.handle.net/1946/32580

OAI identifier oai:identifier

oai:skemman.is:1946/32580