Charakterisierung der allergischen Immunantwort : Vergleich der in-vitro Zytokinproduktion isolierter mononukleärer Zellen und der in-vitro Zytokinproduktion aus Vollblutproben bei Neonaten und Erwachsenen

Ziel dieser Arbeit war es, die Immunantwort des Neugeborenen nach Stimulation mit Mitogenen (PHA) und Allergenen (BLG) zu charakterisieren. Dabei wurde die in-vitro Zytokinproduktion aus Vollblutproben und von isolierten mononukleärer Zellen (MC) bei Neugeborenen (n= 25) und Erwachsenen (n= 25, davon 10 Allergiker) bestimmt, sowie die Vergleichbarkeit beider Verfahren überprüft. MCs wurden mittels der Dichtezentrifugation nach Ficoll separiert und anschließend mit PHA bzw. BLG (PHA 20 µg/ml, BLG 25 µg/ml) inkubiert. Aus den Zellüberständen wurden die Konzentrationen der Zytokine IFN-g, IL-10 und IL-13 mittels ELISA quantifiziert. <br>Bei den Neonaten wurden sowohl nach PHA -, als auch BLG-Stimulation signifikant niedrigere IFN-g (MC: PHA 588 pg/ml; BLG 819 pg/ml) - und IL-10-Werte (MC: PHA 485,7 pg/ml; BLG 163,4 pg/ml) gefunden, als bei den Erwachsenen (MC: IFN-g: PHA 1297 pg/ml, BLG 6592,5 pg/ml; IL-10: PHA 720 pg/ml, BLG 419,9 pg/ml; p jeweils < 0,05). Für IL - 13 fanden wir bei den Neonaten (MC: PHA 701,6 pg/ml) signifikant höhere Werte als bei den Erwachsenen (MC: PHA 333,1 pg/ml; p < 0,05). Konsistent zu diesen Befunden waren in den untersuchten Vollblutproben die IFN-g - und IL-10 - Konzentrationen bei den Neonaten niedriger sowie die IL-13-Werte höher als bei den Erwachsenen. Erwachsenen Allergiker hatten nach BLG - Stimulation signifikant höhere IL-13-Konzentrationen als die Nicht-Allergiker (MC: p=0,03). <br>Bei dem Vergleich der Zytokinwerte aus den Überständen von Vollblut bzw. MC war IL-10 bei den Neonaten und Erwachsenen signifikant korreliert (rs: PHA 0,77; BLG 0,63; p jeweils < 0,05). Für IFN-g und IL-13 sind die Methoden insbesondere bei höheren Messwerten nicht vergleichbar. So waren bei den Erwachsenen die IFN-g - Werte, genauso wie die IL-13-Werte bei den Neonaten nicht miteinander korreliert. Des Weiteren wurde der Effekt der Serumsupplementation in den Kulturansätzen untersucht. Hierbei wurden signifikant höhere IFN-g - Konzentrationen in den Zellüberständen von MC im serumfreien Milieu gefunden (PHA: -Serum 6592,5 pg/ml, +Serum 1297 pg/ml; p < 0,0001). <br>Mit dieser Arbeit wurde gezeigt, dass die methodische Herangehensweise zur Bestimmung von Zytokinen einen ganz entscheidenden Einfluss auf die Ergebnisse hat. Unter diesem Blickwinkel wäre es wünschenswert für die Zukunft, standardisierte Bedingungen zur in-vitro Zytokinbestimmung zu definieren, die einen Vergleich verschiedener Arbeiten zulassen.

Author dc:creator

• Silberer, Jutta Bianca

Contributors dc:contributor

• Kopp, Matthias

• Interferon gamma
• Interleukin 10
• Interleukin 13
• mononukleäre Zellen
• allergy
• immune response
• cytokine
• interleukin
• interferon

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