{"id":{"repo_id":"freiburg-diss","oai_identifier":"oai:freidok.uni-freiburg.de:2149"},"canonical_url":"https://search.dev.ndltd.org/etd/freiburg-diss/oai:freidok.uni-freiburg.de:2149","repository":{"repo_id":"freiburg-diss","name":"University of Freiburg","base_url":"https://freidok.uni-freiburg.de/oai/oai2.php"},"display":{"title":"Charakterisierung der allergischen Immunantwort : Vergleich der in-vitro Zytokinproduktion isolierter mononukleärer Zellen und der in-vitro Zytokinproduktion aus Vollblutproben bei Neonaten und Erwachsenen","abstract":"Ziel dieser Arbeit war es, die Immunantwort des Neugeborenen nach Stimulation mit Mitogenen (PHA) und Allergenen (BLG) zu charakterisieren. Dabei wurde die in-vitro Zytokinproduktion aus Vollblutproben und von isolierten mononukleärer Zellen (MC) bei Neugeborenen (n= 25) und Erwachsenen (n= 25, davon 10 Allergiker) bestimmt, sowie die Vergleichbarkeit beider Verfahren überprüft. MCs wurden mittels der Dichtezentrifugation nach Ficoll separiert und anschließend mit PHA bzw. BLG (PHA 20 µg/ml, BLG 25 µg/ml) inkubiert. Aus den Zellüberständen wurden die Konzentrationen der Zytokine IFN-g, IL-10 und IL-13 mittels ELISA quantifiziert. <br>Bei den Neonaten wurden sowohl nach PHA -, als auch BLG-Stimulation signifikant niedrigere IFN-g (MC: PHA 588 pg/ml; BLG 819 pg/ml) - und IL-10-Werte (MC: PHA 485,7 pg/ml; BLG 163,4 pg/ml) gefunden, als bei den Erwachsenen (MC: IFN-g: PHA 1297 pg/ml, BLG 6592,5 pg/ml; IL-10: PHA 720 pg/ml, BLG 419,9 pg/ml; p jeweils < 0,05). Für IL - 13 fanden wir bei den Neonaten (MC: PHA 701,6 pg/ml) signifikant höhere Werte als bei den Erwachsenen (MC: PHA 333,1 pg/ml; p < 0,05). Konsistent zu diesen Befunden waren in den untersuchten Vollblutproben die IFN-g - und IL-10 - Konzentrationen bei den Neonaten niedriger sowie die IL-13-Werte höher als bei den Erwachsenen. Erwachsenen Allergiker hatten nach BLG - Stimulation signifikant höhere IL-13-Konzentrationen als die Nicht-Allergiker (MC: p=0,03). <br>Bei dem Vergleich der Zytokinwerte aus den Überständen von Vollblut bzw. MC war IL-10 bei den Neonaten und Erwachsenen signifikant korreliert (rs: PHA 0,77; BLG 0,63; p jeweils < 0,05). Für IFN-g und IL-13 sind die Methoden insbesondere bei höheren Messwerten nicht vergleichbar. So waren bei den Erwachsenen die IFN-g - Werte, genauso wie die IL-13-Werte bei den Neonaten nicht miteinander korreliert. Des Weiteren wurde der Effekt der Serumsupplementation in den Kulturansätzen untersucht. Hierbei wurden signifikant höhere IFN-g - Konzentrationen in den Zellüberständen von MC im serumfreien Milieu gefunden (PHA: -Serum 6592,5 pg/ml, +Serum 1297 pg/ml; p < 0,0001). <br>Mit dieser Arbeit wurde gezeigt, dass die methodische Herangehensweise zur Bestimmung von Zytokinen einen ganz entscheidenden Einfluss auf die Ergebnisse hat. Unter diesem Blickwinkel wäre es wünschenswert für die Zukunft, standardisierte Bedingungen zur in-vitro Zytokinbestimmung zu definieren, die einen Vergleich verschiedener Arbeiten zulassen.","abstract_html":"Ziel dieser Arbeit war es, die Immunantwort des Neugeborenen nach Stimulation mit Mitogenen (PHA) und Allergenen (BLG) zu charakterisieren. Dabei wurde die in-vitro Zytokinproduktion aus Vollblutproben und von isolierten mononukleärer Zellen (MC) bei Neugeborenen (n= 25) und Erwachsenen (n= 25, davon 10 Allergiker) bestimmt, sowie die Vergleichbarkeit beider Verfahren überprüft. MCs wurden mittels der Dichtezentrifugation nach Ficoll separiert und anschließend mit PHA bzw. BLG (PHA 20 µg/ml, BLG 25 µg/ml) inkubiert. 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Konsistent zu diesen Befunden waren in den untersuchten Vollblutproben die IFN-g - und IL-10 - Konzentrationen bei den Neonaten niedriger sowie die IL-13-Werte höher als bei den Erwachsenen. Erwachsenen Allergiker hatten nach BLG - Stimulation signifikant höhere IL-13-Konzentrationen als die Nicht-Allergiker (MC: p=0,03). <br>Bei dem Vergleich der Zytokinwerte aus den Überständen von Vollblut bzw. MC war IL-10 bei den Neonaten und Erwachsenen signifikant korreliert (rs: PHA 0,77; BLG 0,63; p jeweils < 0,05). Für IFN-g und IL-13 sind die Methoden insbesondere bei höheren Messwerten nicht vergleichbar. So waren bei den Erwachsenen die IFN-g - Werte, genauso wie die IL-13-Werte bei den Neonaten nicht miteinander korreliert. Des Weiteren wurde der Effekt der Serumsupplementation in den Kulturansätzen untersucht. Hierbei wurden signifikant höhere IFN-g - Konzentrationen in den Zellüberständen von MC im serumfreien Milieu gefunden (PHA: -Serum 6592,5 pg/ml, +Serum 1297 pg/ml; p < 0,0001). <br>Mit dieser Arbeit wurde gezeigt, dass die methodische Herangehensweise zur Bestimmung von Zytokinen einen ganz entscheidenden Einfluss auf die Ergebnisse hat. Unter diesem Blickwinkel wäre es wünschenswert für die Zukunft, standardisierte Bedingungen zur in-vitro Zytokinbestimmung zu definieren, die einen Vergleich verschiedener Arbeiten zulassen.","This work aims to characterize the immune response of neonates after stimulation with mitogenes (PHA) and allergens (BLG). Thereby we determined the in-vitro cytokine production of whole blood devices and of isolated mononuclear cells (MC) of neonates (n=25) and adults (n=25, therefrom 10 who suffer from an allergy), as well as we tested the comparability of both procedures. The MCs were separated with Ficoll density centrifugation and as a result incubated with PHA respectively BLG (PHA 20 µg/ml, BLG 25 µg/ml). The concentration of the cytokines IFN-g, IL-10 and IL-13 was quantified. The neonates showed as well after PHA-, as BLG-stimulation significantly lower IFN-g (MC: PHA 588 pg/ml; BLG 819 pg/ml) and IL-10 values (MC: PHA 485,7 pg/ml; BLG 163,4 pg/ml) than the adults (MC: IFN-g: PHA 1297 pg/ml, BLG 6592,5 pg/ml; IL-10: PHA 720 pg/ml, BLG 419,9 pg/ml; each p < 0,05). For IL-13, we found that the neonates (MC: PHA 701,6 pg/ml) had significantly higher values than the adults (MC: PHA 333,1 pg/ml; p < 0,05). Compatible to this results the neonates showed lower IFN-g and IL-10 concentrations and the adults had lower IL-13 concentrations in the examined whole blood assays. Adults who suffered from an allergy had after BLG- stimulation significantly higher IL-13 concentrations than those who did not (MC: p=0,03). <br>In the comparison of the cytokine values of the supernatants of whole blood respectively MCs IL-10 of the neonates was significantly correlated with these of the adults (rs: PHA 0,77; BLG 0,63; each p < 0,05). Particularly for higher values of IFN-g and IL-13 both methods are not comparable. There was no correlation between the IFN-g values of the adults and the IL-13 values of the neonates. Furthermore we tested the effect of serum supplementation. Doing so we found significantly higher IFN-g concentrations in the supernatants of the MCs in the serumfree medium (PHA: -Serum 6592,5 pg/ml, +Serum 1297 pg/ml; p < 0,0001). <br>We succeeded to show, that the different methods of the act of measuring cytokines have a very important influence on the results. From this point of view it would be desirable for the future to have defined standardized conditions for the in-vitro measurement of cytokines in order to have the possibility to compare different examinations."]},{"key":"dc:format.medium","label":"Dc Format Medium","values":["application/pdf"]},{"key":"dc:title","label":"Title","values":["Charakterisierung der allergischen Immunantwort : Vergleich der in-vitro Zytokinproduktion isolierter mononukleärer Zellen und der in-vitro Zytokinproduktion aus Vollblutproben bei Neonaten und Erwachsenen","Characterization of the allergic immune response : a comparison of the in-vitro cytokine production of isolated mononuclear cells and the in-vitro cytokine production of whole blood of neonates and adults"]}]}],"canonical_facts":{"dc:contributor":["Kopp, Matthias"],"dc:creator":["Silberer, Jutta Bianca"],"dc:description.abstract":["Ziel dieser Arbeit war es, die Immunantwort des Neugeborenen nach Stimulation mit Mitogenen (PHA) und Allergenen (BLG) zu charakterisieren. 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Konsistent zu diesen Befunden waren in den untersuchten Vollblutproben die IFN-g - und IL-10 - Konzentrationen bei den Neonaten niedriger sowie die IL-13-Werte höher als bei den Erwachsenen. Erwachsenen Allergiker hatten nach BLG - Stimulation signifikant höhere IL-13-Konzentrationen als die Nicht-Allergiker (MC: p=0,03). <br>Bei dem Vergleich der Zytokinwerte aus den Überständen von Vollblut bzw. MC war IL-10 bei den Neonaten und Erwachsenen signifikant korreliert (rs: PHA 0,77; BLG 0,63; p jeweils < 0,05). Für IFN-g und IL-13 sind die Methoden insbesondere bei höheren Messwerten nicht vergleichbar. So waren bei den Erwachsenen die IFN-g - Werte, genauso wie die IL-13-Werte bei den Neonaten nicht miteinander korreliert. Des Weiteren wurde der Effekt der Serumsupplementation in den Kulturansätzen untersucht. Hierbei wurden signifikant höhere IFN-g - Konzentrationen in den Zellüberständen von MC im serumfreien Milieu gefunden (PHA: -Serum 6592,5 pg/ml, +Serum 1297 pg/ml; p < 0,0001). <br>Mit dieser Arbeit wurde gezeigt, dass die methodische Herangehensweise zur Bestimmung von Zytokinen einen ganz entscheidenden Einfluss auf die Ergebnisse hat. Unter diesem Blickwinkel wäre es wünschenswert für die Zukunft, standardisierte Bedingungen zur in-vitro Zytokinbestimmung zu definieren, die einen Vergleich verschiedener Arbeiten zulassen.","This work aims to characterize the immune response of neonates after stimulation with mitogenes (PHA) and allergens (BLG). Thereby we determined the in-vitro cytokine production of whole blood devices and of isolated mononuclear cells (MC) of neonates (n=25) and adults (n=25, therefrom 10 who suffer from an allergy), as well as we tested the comparability of both procedures. The MCs were separated with Ficoll density centrifugation and as a result incubated with PHA respectively BLG (PHA 20 µg/ml, BLG 25 µg/ml). The concentration of the cytokines IFN-g, IL-10 and IL-13 was quantified. The neonates showed as well after PHA-, as BLG-stimulation significantly lower IFN-g (MC: PHA 588 pg/ml; BLG 819 pg/ml) and IL-10 values (MC: PHA 485,7 pg/ml; BLG 163,4 pg/ml) than the adults (MC: IFN-g: PHA 1297 pg/ml, BLG 6592,5 pg/ml; IL-10: PHA 720 pg/ml, BLG 419,9 pg/ml; each p < 0,05). For IL-13, we found that the neonates (MC: PHA 701,6 pg/ml) had significantly higher values than the adults (MC: PHA 333,1 pg/ml; p < 0,05). Compatible to this results the neonates showed lower IFN-g and IL-10 concentrations and the adults had lower IL-13 concentrations in the examined whole blood assays. Adults who suffered from an allergy had after BLG- stimulation significantly higher IL-13 concentrations than those who did not (MC: p=0,03). <br>In the comparison of the cytokine values of the supernatants of whole blood respectively MCs IL-10 of the neonates was significantly correlated with these of the adults (rs: PHA 0,77; BLG 0,63; each p < 0,05). Particularly for higher values of IFN-g and IL-13 both methods are not comparable. There was no correlation between the IFN-g values of the adults and the IL-13 values of the neonates. Furthermore we tested the effect of serum supplementation. Doing so we found significantly higher IFN-g concentrations in the supernatants of the MCs in the serumfree medium (PHA: -Serum 6592,5 pg/ml, +Serum 1297 pg/ml; p < 0,0001). <br>We succeeded to show, that the different methods of the act of measuring cytokines have a very important influence on the results. 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