The role of SNAREs in chlamydial infection: Syntaxin 4 and SNAP-23 disrupt lipid droplets homeostasis

As clamídias são bactérias de Gram negativo, intracelulares obrigatórias que infetam células eucarióticas. O seu ciclo de replicação é bifásico, com uma forma extracelular infeciosa e uma forma intracelular replicativa. Dentro da célula, a replicação ocorre exclusivamente no interior de vacúolos, denominados de inclusões. As inclusões resultam da membrana citoplasmática e funcionam como plataformas que as clamídias manipulam para interagir com organelos dentro da célula hospedeira. A sua sobrevivência está intimamente relacionada com a capacidade de adquirir nutrientes, fundindo a inclusão com vários organelos, e com a capacidade de evitar a fusão com os lisossomas, que levaria à sua destruição. Os mecanismos que regulam este balanço são ainda pouco conhecidos, mas sabemos que recorrem a proteínas da célula hospedeira como as proteínas SNARE (Soluble N-ethylmaleimide-sensitive Factor Attachment Protein Receptor). Aqui usámos um modelo de infeção in vitro com Chlamydia trachomatis LGV L2 para estudar a função das SNAREs na aquisição de nutrientes. Os nossos resultados mostram que a SNAP-23 (Synaptosomal-associated Protein 23) e a Sintaxina 4, duas SNAREs presentes na membrana citoplasmática das células eucarióticas, são recrutadas para as inclusões e têm um papel importante no desenvolvimento das clamídias. Mostrámos que ao inibir a sua expressão, através de edição genómica, reduzimos a quantidade de descendência infeciosa gerada num ciclo infecioso. Posteriormente, demonstrámos que a falta de ambas as proteínas SNAREs desregula a formação de lipid droplets (LD), indicando que tanto a SNAP-23 como a Sintaxina 4 têm um papel fundamental na sua homeostasia. Adicionalmente, demonstrámos que essas SNAREs não têm esse impacto na indução de LD por outros estímulos externos, como por exemplo o ácido oleico, sugerindo ser um processo específico da bactéria. Em resumo, o nosso trabalho sustenta a ideia de que as LD são necessárias para o crescimento normal das clamídias e que a inibição tanto da SNAP-23 como da Sintaxina 4 podem alterar a composição das LD. No futuro, a identificação dos componentes moleculares envolvidos neste processo permitirá estudar o mecanismo pelo qual ambas as SNAREs regulam a homeostasia das LD durante a infeção.

Name thesis:degree_name

Doutoramento em Medicina

Grantor

Universidade do Minho

Year dc:date.issued

2022

Author dc:creator

• Brás, Tiago Jorge Monteiro

Advisors dc:contributor.advisor

• Paumet, Fabienne
• Correia-Neves, M

• Bactéria intracelular
• Clamídia
• CRISPR-Cas9
• Lipid Droplets
• SNAREs
• Chlamydia
• Intracellular bacteria

Statement dc:rights

• openAccess

Licence dc:rights.uri

• http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/

Language dc:language.iso

eng

Handle dc:identifier.uri

https://hdl.handle.net/1822/102581

OAI record oai:identifier

http://repositorium.sdum.uminho.pt/oai/request?verb=GetRecord&metadataPrefix=dim&identifier=oai%3Arepositorium.uminho.pt%3A1822%2F102581