Idlitaikinasta eristetyn Lactococcus lactis -maitohappobakteerin tuottaman bakteriosiinin karakterisointi

Bakteriosiinit ovat ribosomaalisesti syntetisoituja antimikrobisia proteiineja tai peptidejä, jotka estävät muiden bakteerien kasvua. Bakteriosiinit voidaan jakaa kolmeen luokkaan niiden ominaisuuksien mukaan. Lactococcus-suvun bakteriosiineja on löydetty ainoastaan luokista I ja II, joihin kuuluu pieniä lämmönkestäviä peptidejä. Luokka III kattaa isommat lämpöherkät proteiinit. Bakteriosiineilla on erilaisia toimintamekanismeja nujertaa kohdebakteeri. Ne voivat joko tappaa bakteerin tai estää sen lisääntymistä. Turvallisten ominaisuuksiensa ansiosta bakteriosiineja voidaan käyttää elintarvikkeissa estämään haittabakteerien kasvua. Tässä maisterintutkielmassa tutkittiin idlitaikinasta eristetyn Lactococcus lactis LAC460 -maitohappobakteerin tuottamaa antimikrobista yhdistettä. Inhibitiokokeiden pohjalta havaittiin, että bakteeri esti joidenkin maitohappobakteerien kasvua muodostamalla indikaattorimaljalla estovyöhykkeen, joka bakteriosiineille epätyypillisesti suureni usean viikon ajan. Tämä viittaa siihen, että kyseinen antimikrobinen yhdiste tappaa myös kasvuvaiheen ohittaneita epäaktiivisia soluja. Bakteerin tuottama antimikrobinen yhdiste osoittautui entsyymitestien perusteella proteiiniksi. LAC460-bakteriosiini menetti tehonsa jo 53°C lämpötilassa, sekä matalassa ja korkeassa pH:ssa, mikä viittaa siihen, että kyseessä on isompi proteiini. LAC460-kanta tuotti bakteriosiinia vasta myöhemmän kasvun vaiheessa. Bakteriosiinia syntyi huomattavasti enemmän, kun kasvatusalusta oli vahvasti puskuroitu vähintään pH-arvoon 7. Ribosomaalisen 16S rDNA-sekvensoinnin, API-testin ja genomisekvensoinnin tulosten perusteella kanta osoittautui L. lactis ja Enterococcus faecium –bakteerien sekaviljelmäksi. Bakteerit erotettiin toisistaan selektiivisillä kasvatusalustoilla, ja selvitettiin, että Lactococcus-osapuoli on varsinainen bakteriosiinin tuottaja. Genomisekvenssistä ei löydetty ilmiselvää bakteriosiinigeeniä, mutta tulosten pohjalta voidaan arvella, että LAC460-bakteriosiini on luokkaan III kuuluva bakteriolysiini. Koska Lactococcus-kantojen ei ole aiemmin havaittu tuottavan luokan III bakteriosiineja, tässä työssä karakterisoitu antimikrobinen proteiini lienee aiemmin tuntematon bakteriosiini.

Grantor dc:publisher

Helsingin yliopisto

Year dc:date.issued

2018

Author dc:creator

• Ahonen, Susanna

Contributors dc:contributor

• Helsingin yliopisto, Maatalous-metsätieteellinen tiedekunta, Elintarvike- ja ympäristötieteiden laitos
• University of Helsinki, Faculty of Agriculture and Forestry, Department of Food and Environmental Sciences
• Helsingfors universitet, Agrikultur- och forstvetenskapliga fakulteten, Institutionen för livsmedels- och miljövetenskaper

• antimikrobinen proteiini
• bakteriolysiini
• bakteriosiini
• Lactococcus lactis
• maitohappobakteeri

Language dc:language.iso

fin

Identifier URI

URN:NBN:fi:hulib-201812123708

OAI identifier oai:identifier

oai:helda.helsinki.fi:10138/275558