Die Expression von E-Cadherin in der Embryonalentwicklung der Maus : Analyse von cis-aktiven regulatorischen Elementen

Korrekte Regulation der Transkription des E-Cadheringens zur Etablierung von homophiler Zell-Adhäsion ist notwendig für einwandfreie frühe Embryonalentwicklung und Organogenese. Trotz der Bedeutung von E-Cadherin bei der Embryogenese, im intakten Organismus, sowie der veränderten Expression bei der Tumorentstehung, ist jedoch bisher über die Regulation wenig bekannt. In dieser Arbeit sollten die bekannten cis-aktiven Sequenzen in vivo untersucht und Sequenzen von Intron 2 auf ihr regulatorische Funktion bei der Genregulation untersucht werden. Zur Analyse wurden Ansätze mit transgenen und E-Cadherin „knock-in“ Mäusen, sowie vergleichende Genomanalyse und in vitro Differenzierung von Teratokarzinomzellen verwendet. <br>Verschiedene E-Cadherin-lacZ Reporter Konstrukte mit Sequenzen zwischen –6 und +16 kb inklusive aller kartierten DHS dienten der Etablierung transgener Mäuse. Die Analyse zeigte, dass Promoterfragmente ohne zusätzliche Intron Sequenzen nicht ausreichend sind, um das Gen zu aktivieren. In dem Bereich von –6 bis –1,5 kb konnten gehirnspezifische und im Bereich von +0,1 bis +11 kb entodermspezifische regulatorische Sequenzen identifiziert werden. Die Expression der Transgene konnte mit Sequenzen zwischen +11 und +16 kb generell verstärkt werden. Dem analysierten Bereich fehlen aber dennoch Elemente, die zum vollständigen endogenen Expressionsmuster von E-Cadherin beitragen. <br>Zur Visualisierung der vollständigen Genaktivität wurde ein „knock-in“ Mausstamm mit lacZ unter Kontrolle des E-Cadheringens generiert. Die Expression dieses Allels reflektiert in vivo die korrekte E-Cadherin Expression. Die Deletion des gesamten Intron 2 am endogenen Locus hat in differenzierten Epithelien und ES-Zellen einen Verlust der Expression zur Folge. Die Ergebnisse zeigen, dass die E-Cadherin Expression durch ein komplexes Zusammenspiel von multiplen Sequenzabschnitten mit regulatorischen Eigenschaften gesteuert wird, die über einen großen Bereich des Locus verteilt sind.

Author dc:creator

• Stemmler, Marc

Contributors dc:contributor

• Kemler, Rolf

• lacZ
• Cre/loxP
• E-Cadherin
• cis-regulatorische Elemente
• transgenic moue
• cis-regulatory elements

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