Screening auf Interaktionspartner für den hämatologischen Rezeptor PRV-1 : PRV-1 interagiert mit Decorin, C1qB und Defensin alpha 3

Die Polycythaemia Rubra Vera (=PV) ist eine klonale Stammzellerkrankung des hämatologischen Systems. PRV-1 (=Polyzythämia Rubra Vera-1) ist ein hämatologischer Oberflächenrezeptor, dessen mRNA in den Granulozyten von nahezu allen PV Patienten, sowie bei einigen Patienten mit Osteomyelofibrose, mit Essentieller Thrombozythämie, bei entzündlichen Erkrankungen und nach G-CSF-/ GM-CSF-Gabe überexprimiert wird. Da bei sekundären Erythrozytosen und Leukämien diese Überexpression nicht besteht, kann PRV-1 als molekularer Marker zur Diagnose der PV beitragen. <br>In der vorliegenden Doktorarbeit wurde nach Interaktionspartnern für PRV-1 gesucht, um darüber Hinweise auf dessen bisher unbekannte Funktion zu erhalten. Dazu wurden 153 aus einem mit einer Knochenmark cDNA Bank durchgeführten Yeast Two Hybrid Assay hervorgegangene positive cDNA-Klone isoliert. Nach Sequenzierung wurden die Klone durch Abgleich mit der NCBI Datenbank identifiziert. Davon wurden acht cDNAs, die potentiell für eine in vivo Interaktion mit PRV-1 in Frage kommen, zur weiteren Analyse ausgewählt. Da ein mit eukaryontisch exprimiertem Protein durchgeführter GST Pull Down Assay keine konsistenten Ergebnisse lieferte, wurde ein bakterieller GST Pull Down Assay etabliert. Darüber konnte für die Proteine Decorin, C1qB und Defensin in vitro eine physikalische Interaktion mit PRV-1 nachgewiesen werden. Während C1qB und Defensin eine schwächere Interaktion zeigten, ließ sich für Decorin eine starke Bindung an PRV-1 nachweisen. Da die cDNA Bank oft nur ein Fragment der Proteine enthielt, kann die für die Bindung an PRV-1 verantwortliche Region näher eingegrenzt werden. <br>Decorin ist durch Interaktionen mit verschiedenen Wachstumsfaktoren an der Regulation der Proliferation, Apoptose, Aktivierung und Adhäsion von Zellen im Rahmen von entzündlichen, tumorösen und fibrotischen Prozessen beteiligt. C1q als erste Komponente des Komplementsystems aktiviert einerseits über eine Bindung an die Fc-Domäne von Antikörpern die Komplementkaskade und sorgt andererseits über direkte Bindung an Makrophagen und Granulozyten für deren Aktivierung. Das von Granulozyten synthetisierte Defensin-&#945;3 wirkt chemotaktisch auf Makrophagen und moduliert die Zytokinproduktion. <br>Die hier nachgewiesenen Interaktionen legen daher einen Einfluss von PRV-1 auf die Kontrolle von Wachstum, Überleben und Funktion von myeloischen Zellen, sowohl bei entzündlichen Prozessen als auch im Rahmen der Pathogenese der PV nahe.

Author dc:creator

• Coch, Christoph

Contributors dc:contributor

• Pahl, Heike-L.

• Polyzythämia Rubra Vera
• PRV-1
• Decorin
• C1
• Defensin
• Polycythaemia vera

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