Untersuchungen zur Struktur und Substratspezifität des AAA+-Chaperons ClpB in Escherichia coli

Die Autorin befaßte sich in ihrer Arbeit mit der Struktur, nukleotidabhängigen Konformationsänderungen und der Substratspezifität des AAA+ Chaperons ClpB aus dem gram-negativen Modellorganismus Escherichia coli. <br>Zur Untersuchung der Struktur von ClpB wurde die Methode der limitierten Proteolyse verwendet. Daran schloß sich eine massenspektrometrischer Analyse der Fragmente an (massenspektrometrische Analyse durchgeführt von Dr. W. Rist, AG Bukau). Folgende Ergebnisse wurden erzielt: <br>(1) In ClpB existieren proteolyseresistente Domänen. <br>(2) ClpB ändert nukleotidabhängig seine Konformation, da die Bindung von Nukleotiden wie ATP eine Änderung des Musters proteolyseresistenter Domänen bedingt. <br>(3) Die Bildung von Hexameren schützt Vollängen-ClpB vor Proteolyse. ClpB-Mutanten, die nicht oligomerisieren können, werden in verstärktem Maße von Proteasen angegriffen und schneller degradiert. <br> <br>Sich der Analyse von Peptidbibliotheken (Dr. H. Patzelt, AG Bukau) anschließende Experimente zur Substratspezifität von ClpB zeigten folgende Ergebnisse: <br>(1) Casein ist ein ClpB-Substrat und inhibiert die ClpB-vermittelte Auflösung von Proteinaggregaten. <br>(2) Poly-L-Lysin ist kein Substrat von ClpB, sondern ein Effektor, der durch Stimulation der ATPase-Aktivität die Disaggregationsaktivität von ClpB erhöht. <br>(3) Peptide, die als ClpB-Binder in Peptidbibliotheken identifiziert wurden, zeigen in Experimenten ähnliche Eigenschaften wie Casein. Die Sequenzspezifität der ClpB-bindenden Peptide konnte in nachfolgenden Experimenten bestätigt werden.

Author dc:creator

• Strub, Christine Eva

Contributors dc:contributor

• Bukau, Bernd

• Chaperone
• ClpB
• AAA+-Protein
• DnaK
• AAA+ protein
• protein disaggregation

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