Analyse der Low-Density-Lipoproteine (LDL) : kann die LFE die UZ-Fraktionierung von LDL ersetzen?

Koronare Herzkrankheit und Schlaganfall sind die fatalen Endpunkte der Atheroskle­rose. Unter den Risikofaktoren nehmen vor allem Cholesterin und Neutralfette trans­por­tierende Lipoproteine eine herausragende Stellung ein. Lipoproteine können in Fraktionen und Subfraktionen getrennt werden. In vielen epidemiologischen Studien war gezeigt worden, dass von den Low-Density-Lipoproteinen (LDL) besonders die Subfraktionen mit kleinen, dichten Partikeln mit einem erhöhten Risiko für Herz-Kreislauferkrankungen assoziiert sind. <br>Um diese besonders atherogenen LDL-Partikel diagnostisch zu erfassen, ist eine Auf­trennung in LDL-Subfraktionen erforderlich. Hierzu dient die analytische Ultrazentri­fuge (UZ) als das (zeitaufwendige) Standardverfahren. In dieser Arbeit wurde untersucht, in wieweit eine ver­gleich­bare Auftrennung der LDL aus dem Serum durch eine Gradientengel-Elektrophorese (LFE) möglich ist. Mittels der LFE werden die Lipoproteine durch die kleinen Unterschiede ihrer Wanderungsgeschwindigkeiten auf dem Gradientengel der Grösse nach getrennt. Entsprechend den Fraktionen LDL1 bis LDL6 zunehmender Dichte aus der UZ-Analyse wurden die LDL-Fraktionen in der LFE ebenfalls in sechs Sub­fraktionen unterteilt. Da die Unterschiede der Rs-Werte innerhalb der LDL-Fraktion zwischen LDL1 und LDL6 klein sind, ist es notwendig, einen Standard aus UZ-LDL1 und UZ-LDL6 jeweils rechts und links vom Patientenserum aufzutragen. Die Zuordnung der LDL-Hauptfraktion für das Serum erfolgte anhand seines Rs-Wertes relativ zu den gemittelten Rs-Werten für die UZ-Standard-Banden der benachbarten Spuren. Die densitometrische Bestimmung der Rs-Werte wurde mittels des Software-Programms Scan-Pack 3.0 vor­ge­nommen. <br>Von 82 Patientenseren wurden die jeweils mit UZ und mit LFE bestimmten LDL-Subfraktionen miteinander verglichen. Als Bezugsgrössen zur Ermittlung der UZ-LDL-Hauptfraktionen dienten dabei die fraktionsweise gemessenen ApoB- und Chol-Werte. Bei 28 Seren ergab sich in den UZ-Subfraktionen keine Hauptfraktion, sondern eine annähernde Gleichverteilung der Messparameter. Eine Zuordnung entfiel daher für diese Seren. Als UZ-Hauptfraktion wurden dann nur solche Proben mit ApoB- bzw. Chol-Werten > 23%, > 25% bzw. > 27% zugelassen. Bei einem cut-off von 23% ApoB wurde für 56% der Proben eine Über­einstimmung mit den Ergebnissen der LFE gefunden, bei > 25% stimmten 61% überein und bei > 27% wiesen 64% eine gleiche Zuordnung hinsichtlich der markanten LDL-Subfraktionen auf. Die gleichartige Auswertung anhand der Chol-Werte zeigte den gleichen Trend, die Übereinstimmung beider Verfahren war aber etwas geringer. Wertet man nach einem Modus aus, bei dem LDL1 und LDL2 zu einer Fraktion weniger atherogener Partikel, LDL3 und LDL4 als Zwischenfraktion und schließlich LDL5 und LDL6 als hochatherogene Subfraktion jeweils zusammengezogen bei einem cut-off von 33% ApoB zum Vergleich mit den LDL-Fraktionen der LFE gebracht werden, resultiert eine Äquivalenz von 72% der Subfraktionen. <br>Die LFE ermöglicht es, bei sorgfältiger Arbeitsweise aus nativen Seren ein Lipidprofil durch Aufspaltung in die VLDL, IDL sowie die LDL- und HDL-Subfraktionen zu erstellen. Darüber hinaus ermöglicht die LFE auch die Detektion und (halbquantitative) Bestimmung von Banden, die vor LDL1 und hinter LDL6 auftreten und in der UZ zum Teil mit diesen zusammen bestimmt werden. Hier liefert die LFE verglichen mit der UZ zusätzliche wertvolle Informationen.

Author dc:creator

• Knothe, Ingrid

Contributors dc:contributor

• Wieland, Heinrich

• Gradientengelelektrophorese
• Lipid metabolism
• Low-density-lipoproteins
• Electrophoresis

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