The involvement of second messenger signalling in impaired integrin function of HIV-1 infected macrophages

Durch die Anwendung von cAMP–Analoga konnte gezeigt werden, dass Komplement-vermittelte Phagozytose (KVP) menschlicher, von Monozyten-abstammenden Macrophagen durch cAMP beeinträchtigt wird. Es war daher theoretisch denkbar, dass die während einer HIV-1 Infektion auftretende erhöhte intrazelluläre Konzentration dieses Nukleotids negative Effekte auf die KVP ausübt. <br>Ziel dieser Studie war es den Einfluss von HIV-1 auf die Mechanismen von Komplement-vermittelter-Phagozytose menschlicher Macrophagen offenzulegen. <br>Mit Hilfe eines kolorimetrischen Assays und Schaferythrozyten als Phagozytose-Partikeln (opsoniert mit humanem Serum als Quelle für Komplement-Komponenten) war es möglich KVP in Makrophagen während florider Infektion (7-10d) mit einem Labor-adaptierten M-tropischen Virus zu quantifizieren. <br>In ausgewählten Experimenten wurden Phagen 7 Tage nach Infektion mit Forskolin (10mins, 0.01µM to 100µM), 2’-5’-Dideoxyadenosin (ddAD, 30min, 0.1µM to 10µM), oder MDL-12,330 A (30mins, 0.1µM to 5µM) vorbehandelt. Um das Verhalten der Zellen in Abwesenheit aktiver retroviraler Replikation zu messen, benutzten wir Lamivudin (100µM). <br>Tatsächlich bestätigten direkte cAMP-Messungen den Anstieg von desselben unter HIV-1 in unseren Zellen. Übereinstimmend mit Resultaten aus den cAMP-Analoga-Experimenten konnte Forskolin in nicht-infizierten Phagen die KVP stark inhibieren (zu 80%, 100µM, p<0.0016). Im Gegenzug wurde eine signifikante Zunahme der Phagozytose-Aktivität unter Inkubation mit ansteigender Konzentration von ddAD (bis 10 µg/mL) sowohl in HIV-1 infizierten und Kontrollzellen (entsprechend 57 ± 20%, und 30 ± 6%) beobachtet. <br>In Gegenwart von 10µg/mL 2’5’ddAD nahm die Partikel-Aufnahme infizierter Zellen bis auf 97% HIV-negativer, unbehandelter Kontrollen zu. In weiteren Untersuchungen konnte kein Anstieg von PGE2 in Kultur-Überstand, bekannt für seine potentierende Wirkung auf die Adenylatzyklase, bestätigt werden. Ebenso korrelierte das Defizit der KVP nicht mit aktiver viraler Replikation, wie sich unter der Behandlung mit antiviralem Agens Lamivudin zeigte. <br>Zusammenfassend ist es uns gelungen, unabhängig von der Prostaglandin-Sekretion und viraler Replikation, in HIV-1 infizierten menschlichen Makrophagen die Integrin-vermittelte Phagozytose durch 2’5’ddAD bis auf das Niveau gesunder Zellen zu heben, was unsere Vermutung bestätigt, dass erhöhtes cAMP in diesem System zu gestörter Komplement-Rezeptor-Funktion beiträgt.

Author dc:creator

• Doischer, Daniel

Contributors dc:contributor

• Frank, Uwe

• HIV
• Phagozytose
• Makrophage
• Integrine
• Phagocytosis
• Macrophages
• Integrins

Repository record source_url

https://freidok.uni-freiburg.de/data/1920

OAI identifier oai:identifier

oai:freidok.uni-freiburg.de:1920