Der monoklonale Antikörper Som5H5 : Charakterisierung seines Antigens in der Embryonalentwicklung des Hühnchens

Das Ziel der vorliegenden Arbeit war es, das Antigen des <br>monoklonalen Antikörpers Som5H5 zu bestimmen und es <br>hinsichtlich seines Auftretens in der frühen <br>Embryonalentwicklung des Hühnchens zu charakterisieren. Mit <br>Hilfe verschiedener biochemischer Verfahren wurde das <br>Som5H5-Protein isoliert, massenspektroskopisch analysiert <br>und seine Identität gezielt überprüft. Es handelt sich <br>demnach um das Intermediärfilament-Protein Vimentin des <br>Hühnchens. <br>In immunhistochemischen Färbereihen wurde mit dem <br>Som5H5-Antikörper das Auftreten von Vimentin in <br>verschiedenen Stadien der Hühnchenentwicklung dargestellt <br>und mit dem Muster eines kommerziell erhältlichen <br>monoklonalen Anti-Vimentin-Antikörpers (Klon V9) <br>verglichen. Die Signale des Som5H5-Antikörpers fanden sich <br>sowohl in Zellen ektodermalen Ursprungs (Neuralrohr, <br>Neuralleistenderivate) wie auch in Zellen mesodermaler <br>Herkunft (Chorda dorsalis, Somitenepithel, Myotom, Aorta, <br>Nierenanlage, Wirbelanlage) und Entodermderivaten <br>(Darmrohrepithel, Luftsackanlagen). Zudem wurde in der Nähe <br>der Extremitätenanlage eine unbekannte Zone markiert. Der <br>kommerziell erhältliche Antikörper erzeugte ein Muster, das <br>zum einen einige dieser Strukturen nicht enthielt und zum <br>anderen die detektierten Strukturen anders markierte. <br>Generell färbte er in Kryoschnitten die Zellkerne der <br>positiven Gewebe, während der Som5H5-Antikörper stets nur <br>zytoplasmatische Bestandteile erkannte. <br>Bei Anwendung von Som5H5 an adulter <br>Hühnchen-Skelettmuskulatur zeigte sich das <br>Querstreifenmuster der Vimentin enthaltenden Costamere. <br>Zur Verifizierung der immunhistochemischen Färbemuster <br>wurden in situ-Hybridisierungen an Hühnchenembryonen <br>durchgeführt. In whole-mount-Färbungen konnte eine <br>Expression von Vimentin in der Extremitätenanlage <br>nachgewiesen und in Verlauf und Ausdehnung charakterisiert <br>werden. Es handelt sich hierbei um eine scharf begrenzte <br>Zone im posterio-proximalen Bereich der oberen und unteren <br>Extremität, die im HH-Stadium 20 erscheint, im HH-Stadium <br>26 ihre maximale Ausdehnung erreicht, dabei auch auf die <br>Rumpfwand übergreift, und sich anschließend rasch wieder <br>verkleinert. Vergleiche mit anderen morphologischen oder <br>funktionellen Zonen der Extremitätenentwicklung zeigten <br>keinerlei Ähnlichkeit. <br>In Wirbelanlagen von HH-Stadium-34-Embryonen wurden Zellen <br>des Randbereichs (Perichordium) gefärbt, während sich die <br>Chondrozyten Vimentin-negativ darstellten.

Author dc:creator

• Noack, Christian

Contributors dc:contributor

• Brand-Saberi, Beate

• Vimentin
• Extremitätenanlage
• chick
• embryo
• intermediate filament
• limb bud

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