Untersuchung zur Proliferation neocorticaler und hippokampaler Neurone in vitro

Diese Arbeit untersucht die Proliferation neocorticaler und hippokampaler Neurone in vitro. Ziel war, neocorticale Primärkulturen der neugeborenen Ratte nach Zelltypen aufzutrennen und in reineren Kulturen zu vermehren. Besonderes Interesse galt der Anreicherung neuronaler Präkursoren und der Kultur reiner Astrozyten. Dazu wurden neocorticale Primärkulturen mechanisch (durch Panning und getrennte Aussaat des Überstandes) und pharmakologisch (mit b-FGF, CNTF oder Cytosin-Arabinosid [CA]) beeinflußt. Veränderungen der Zellzahlen und -morphologie wurden mit immunzytochemischen und anderen Färbungen untersucht. Es wurde festgestellt, daß die Variation der Kulturbedingungen (Aussaatdichte oder Inkubationsmedium) großen Einfluß auf die Zahl der aufliegenden Neurone hat. Durch Panning (Schütteln der Zellkulturen nach Aussaat und Absaugen des Überstandes) wurden viele Neurone entfernt. Im Überstand fanden sich neben Astrozyten und differenzierten Neuronen proliferationsfähige neuronale Präkursoren. Neuronenfreie Astrozytenkulturen ließen sich über mehrere Wege herstellen (exakte Präparation der weißen Substanz, Panning, Inkubation mit CA). CNTF führte zu Neuronendifferenzierung. B-FGF-Gabe nach Astrozytenkonfluenz hatte keinen stimulierenden Effekt auf neuronale Präkursoren. Weiterhin wurden im Lichtmikroskop auffallende unterschiedliche Neurone in hippokampalen Primärkulturen und ihr Proliferationsverhalten untersucht. In den ersten 14 DIV konnten voneinander unabhängig proliferierende neuronale Subpopulationen (bipolare, multipolare und pyramidale Neurone) nachgewiesen werden. Nach Inkubation hippokampaler Kulturen mit dem Mitoseinhibitor PACAP sank die Gesamtzahl der Neurone bei Zunahme der multipolaren Neurone. Typ 1-Astrozyten lagen sternförmig vor. Die PACAP-Wirkung fand wahrscheinlich über Aktivierung der Proteinkinase C statt. Gabe von CNTF oder KCl führte zu besserer Neuronendifferenzierung. B-FGF hatte keinen Einfluß auf hippokampale Neurone.

Author dc:creator

• Thyerlei, Dinah

Contributors dc:contributor

• Meyer, Dieter K.

• Neuron
• Panning
• Aussaatdichte
• PACAP
• seeding density

Repository record source_url

https://freidok.uni-freiburg.de/data/1031

OAI identifier oai:identifier

oai:freidok.uni-freiburg.de:1031