{"id":{"repo_id":"freiburg-diss","oai_identifier":"oai:freidok.uni-freiburg.de:1031"},"canonical_url":"https://search.dev.ndltd.org/etd/freiburg-diss/oai:freidok.uni-freiburg.de:1031","repository":{"repo_id":"freiburg-diss","name":"University of Freiburg","base_url":"https://freidok.uni-freiburg.de/oai/oai2.php"},"display":{"title":"Untersuchung zur Proliferation neocorticaler und hippokampaler Neurone in vitro","abstract":"Diese Arbeit untersucht die Proliferation neocorticaler und hippokampaler Neurone in vitro. Ziel war, neocorticale Primärkulturen der neugeborenen Ratte nach Zelltypen aufzutrennen und in reineren Kulturen zu vermehren. Besonderes Interesse galt der Anreicherung neuronaler Präkursoren und der Kultur reiner Astrozyten. Dazu wurden neocorticale Primärkulturen mechanisch (durch Panning und getrennte Aussaat des Überstandes) und pharmakologisch (mit b-FGF, CNTF oder Cytosin-Arabinosid [CA]) beeinflußt. Veränderungen der Zellzahlen und -morphologie wurden mit immunzytochemischen und anderen Färbungen untersucht. Es wurde festgestellt, daß die Variation der Kulturbedingungen (Aussaatdichte oder Inkubationsmedium) großen Einfluß auf die Zahl der aufliegenden Neurone hat. Durch Panning (Schütteln der Zellkulturen nach Aussaat und Absaugen des Überstandes) wurden viele Neurone entfernt. Im Überstand fanden sich neben Astrozyten und differenzierten Neuronen proliferationsfähige neuronale Präkursoren. Neuronenfreie Astrozytenkulturen ließen sich über mehrere Wege herstellen (exakte Präparation der weißen Substanz, Panning, Inkubation mit CA). CNTF führte zu Neuronendifferenzierung. B-FGF-Gabe nach Astrozytenkonfluenz hatte keinen stimulierenden Effekt auf neuronale Präkursoren. Weiterhin wurden im Lichtmikroskop auffallende unterschiedliche Neurone in hippokampalen Primärkulturen und ihr Proliferationsverhalten untersucht. In den ersten 14 DIV konnten voneinander unabhängig proliferierende neuronale Subpopulationen (bipolare, multipolare und pyramidale Neurone) nachgewiesen werden. Nach Inkubation hippokampaler Kulturen mit dem Mitoseinhibitor PACAP sank die Gesamtzahl der Neurone bei Zunahme der multipolaren Neurone. Typ 1-Astrozyten lagen sternförmig vor. Die PACAP-Wirkung fand wahrscheinlich über Aktivierung der Proteinkinase C statt. Gabe von CNTF oder KCl führte zu besserer Neuronendifferenzierung. B-FGF hatte keinen Einfluß auf hippokampale Neurone.","abstract_html":"Diese Arbeit untersucht die Proliferation neocorticaler und hippokampaler Neurone in vitro. Ziel war, neocorticale Primärkulturen der neugeborenen Ratte nach Zelltypen aufzutrennen und in reineren Kulturen zu vermehren. Besonderes Interesse galt der Anreicherung neuronaler Präkursoren und der Kultur reiner Astrozyten. Dazu wurden neocorticale Primärkulturen mechanisch (durch Panning und getrennte Aussaat des Überstandes) und pharmakologisch (mit b-FGF, CNTF oder Cytosin-Arabinosid [CA]) beeinflußt. Veränderungen der Zellzahlen und -morphologie wurden mit immunzytochemischen und anderen Färbungen untersucht. Es wurde festgestellt, daß die Variation der Kulturbedingungen (Aussaatdichte oder Inkubationsmedium) großen Einfluß auf die Zahl der aufliegenden Neurone hat. Durch Panning (Schütteln der Zellkulturen nach Aussaat und Absaugen des Überstandes) wurden viele Neurone entfernt. Im Überstand fanden sich neben Astrozyten und differenzierten Neuronen proliferationsfähige neuronale Präkursoren. Neuronenfreie Astrozytenkulturen ließen sich über mehrere Wege herstellen (exakte Präparation der weißen Substanz, Panning, Inkubation mit CA). CNTF führte zu Neuronendifferenzierung. B-FGF-Gabe nach Astrozytenkonfluenz hatte keinen stimulierenden Effekt auf neuronale Präkursoren. 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B-FGF hatte keinen Einfluß auf hippokampale Neurone.","In this thesis the proliferation of neocortical and hippocampal neurons in vitro is examined. One aim was to differentiate the different cell types of neocortical primary cultures of newborn rats and to augment cells in purer cultures. Special interest was given to the accumulation of neuronal precursor cells and the culture of pure astrocytes. For this neocortical primary cultures were influenced mechanically (by panning or separate seeding of the supernatant) or pharmacologically (with b-FGF, CNTF or cytosine-arabinoside CA). Differences in cell numbers and morphology were examined with immunocytochemical and other stains. In detail it was found that the variation of culture conditions (seeding density or culture medium) had a large influence on the number of neurons growing on top of astrocytes. Panning (shuffling of cell cultures after seeding and suction of the supernatant) removed most neurons. Besides astrocytes and differentiated neurons the supernatant contained neuronal precursors. Astroglial cultures free of neurons (for pharmacological tests) could be produced via multiple ways (exact preparation of white matter, panning, incubation with CA). CNTF lead to better differentiation of neurons. B-FGF after confluence of astrocytes did not stimulate neuronal precursors. Another aim was to examine the microscopically different neuronal populations in hippocampal cultures and their proliferation patterns. During the first two weeks in vitro independently proliferating neuronal subpopulations (bipolar, multipolar and pyramidal) were found. Incubation of hippocampal cultures with PACAP showed that the number of all neurons tended to sink, while multipolar neurons increased. Type 1 astrocytes were stellate. The effect of PACAP probably took place via activation of protein kinase C. CNTF and KCl lead to better neuronal differentiation. 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