Relación entre NETs, microbiota intestinal y translocación bacteriana en pacientes infectados por VIH y en un modelo animal con depleción de BATF

CONOCIMIENTOS PREVIOS Las personas que viven con VIH (PLWH), incluso tras conseguir una carga viral indetectable gracias a tratamientos antirretrovirales (TAR), presentan una activación inmune e inflamatoria persistente, en la que participan distintas células inmunes. Entre éstas, la implicación de los polimorfonucleares neutrófilos, particularmente a través de la formación y liberación de trampas extracelulares de neutrófilos (NETs, NETosis), ha sido escasamente estudiada. Como consecuencia de la activación inmune e inflamatoria persistente, las PLWH tienen mayor riesgo de desarrollar enfermedades cardiovasculares. Entre los factores clave que contribuyen a este estado de activación inmune e inflamatoria se encuentran la alteración de la microbiota y la barrera intestinal. El modelo de ratones Batf-/- (knock-out), que presenta un déficit de linfocitos Th17 similar al observado en PLWH con carga viral controlada, permite estudiar estos fenómenos en condiciones controladas. OBJETIVOS En PLWH con carga viral indetectable, se plantea como objetivo evaluar la composición de la microbiota fecal y su relación con diversos parámetros de salud intestinal, activación inmunológica y patología vascular. Se plantean como objetivos concretos analizar la composición de la microbiota intestinal, el estado de la barrera intestinal, la translocación bacteriana; evaluar el estado de activación inflamatoria (incluyendo la formación de NETs) e inmune y correlacionarla con los anteriores; y finalmente, analizar el estado de activación vascular y plaquetaria y la presencia de aterosclerosis subclínica carotídea, como una función de los anteriores y de los factores clásicos de aterosclerosis. Se considerará la influencia de las prácticas sexuales, la adherencia a la dieta mediterránea y la TAR de las PLWH. En el modelo animal, se plantea como objetivo el estudio de los efectos de la deficiencia de Batf en las alteraciones de la pared intestinal, y su relación con la composición de la microbiota fecal y la translocación bacteriana. También se evaluará la situación inmune e inflamatoria, y los efectos de la suplementación de la dieta con prebióticos o probióticos en estos parámetros. METODOLOGÍA Se seleccionó una muestra de 120 PLWH con infección crónica y carga de VIH indetectable, y 30 controles sanos emparejados por edad y sexo. Se analizaron la diversidad y composición de la microbiota intestinal, así como los marcadores de integridad intestinal (intestinal fatty acid binding protein, I-FABP), translocación bacteriana (ADNr bacteriano 16S), activación inmune (linfocitos T activados), inflamatoria (interleucina 6 IL-6, CD163 soluble sCD163, proteína C reactiva de alta sensibilidad hsCRP, formación de NETs), endotelial (E-selectina, molécula de adhesión de células vasculares 1 VCAM-1) y plaquetaria (P-selectina, factor plaquetario 4 PF4), y factores de riesgo cardiovascular incluidos en las escalas REGICOR y ASCVD. Se estudió la existencia de aterosclerosis subclínica, detectada mediante ecografía Doppler carotídea, así como el efecto sobre los parámetros mencionados de la TAR, la adherencia a la dieta mediterránea (evaluada mediante un cuestionario de 14 preguntas) o el tipo de prácticas sexuales. Se realizaron estudios similares en ratones Batf-/- y WT, evaluándose en ellos también la microbiota intestinal, la integridad intestinal (mediante la expresión de los genes Tjp1 y Ocln y la concentración sérica de I-FABP), translocación bacteriana (aislamiento microbiológico en ganglios mesentéricos), activación inmune (CD4 CD38 y CD8 CD38 ) e inflamatoria (CD14 soluble e IL-6). Además, se analizó el efecto de la suplementación de la dieta con prebiótico (maltodextrina resistente a la digestión) o probiótico (preparado comercial multicepa). RESULTADOS Los hallazgos indican que las PLWH muestran una alteración significativa de la microbiota intestinal, caracterizada por una menor abundancia de géneros estimulantes de la síntesis de moco de adecuada calidad e implicados en la eliminación de sustancias nocivas para la pared; y no tanto en la producción de ácidos grasos de cadena corta, o por un exceso de géneros con mayor capacidad de translocación. Las modificaciones en la microbiota intestinal están influenciadas levemente por el tratamiento antirretroviral o la dieta, y de un modo más significativo por las prácticas sexuales. Las PLWH presentan una activación inflamatoria caracterizada, entre otras, por la mayor formación de NETs, así como una activación plaquetaria y del sistema de la coagulación/fibrinolisis. La prevalencia de alteraciones aterosclerosas es significativamente mayor que la de la población control. Las PLWH con lesión carotídea definida presentaron unos índices de riesgo cardiovascular (medidos por las escalas REGICOR y ASCVD) significativamente superiores a los de los controles sanos, así como una menor adherencia a la dieta mediterránea y una mayor activación inflamatoria (manifestada por el incremento de IL-6 y NETs). Los factores implicados de modo independiente en la lesión carotídea fueron el índice REGICOR y la concentración sérica de IL-6. En el modelo animal, se observó una mayor frecuencia de microorganismos en los ganglios linfáticos mesentéricos de los ratones Batf-/- que en los de los ratones WT (wild type), lo que implica una mayor translocación bacteriana. Estos ratones Batf-/- mostraron una mayor activación inflamatoria e inmune. La suplementación con probióticos determinó un enriquecimiento en la microbiota fecal de Candidatus Arthromitus, una bacteria filamentosa segmentada, y concomitantemente un aumento del recuento de linfocitos Th17 y un descenso de marcadores de activación inflamatoria e inmune periférica. CONCLUSIONES Las PLWH, a pesar de mantener el control de la replicación viral de modo prolongado, presentan alteraciones de la microbiota intestinal, caracterizadas por una disminución de géneros con características beneficiosas. Las conductas sexuales influencian marcadamente la microbiota intestinal. Las PLWH presentan una mayor translocación bacteriana, activación inmune e inflamatoria (incluyendo en la misma la mayor producción de NETs), activación plaquetaria y del sistema de coagulación/fibrinolisis, así como una mayor prevalencia de aterosclerosis carotídea. Esta última está independientemente influenciada por los factores clásicos de riesgo cardiovascular y por la activación inflamatoria. Los ratones Batf-/- son un buen modelo de estudio de translocación bacteriana, activación inflamatoria e inmune, con notables similitudes a las presentes en PLWH con carga viral indetectable. En este modelo animal, el uso de probióticos se asocia a una reducción de la activación inmune e inflamatoria y a un incremento del recuento de linfocitos Th17.

Author dc:creator

• Illanes Álvarez, Francisco

Advisors dc:contributor.advisor

• Girón González, José Antonio
• Cuesta Sancho, Sara

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• http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

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spa

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http://hdl.handle.net/10498/39644

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oai:rodin.uca.es:10498/39644