Funktionelle Analyse des murinen 66.3-kDa-Proteins

Im Mittelpunkt dieser Arbeit stand das 2005 erstmals beschriebene murine lysosomale Matrixprotein 66.3-kDa-Protein. Die Interaktion des 66.3-kDa-Proteins mit der lysosomalen Aspartylprotease Cathepsin D, welche während der ausführlichen molekularen Charakterisierung vermutet wurde, konnte im Rahmen der vorliegenden Arbeit mit verschiedenen Interaktionsstudien (Ko-Immunpräzipitation, Pepstatin-A-Chromatographie, Vernetzung mit heterobifunktionalen Quervernetzern) bestätigt werden. Das zuvor beschriebene Prozessierungsmuster für das 66.3-kDa-Protein konnte durch die Identifizierung eines weiteren Fragments mittels MALDI-TOF-MS/PMF und Western-Blot-Untersuchungen vervollständigt werden. Die Prozessierung des 66.3-kDa-Proteins stellt sich demnach als zweistufiger autokatalytischer Prozess dar. Die drei entstandenen Fragmente bleiben nicht-kovalent miteinander verknüpft und stellen vermutlich die aktive Form des 66.3-kDa-Proteins dar. Zudem konnte mittels Gelfiltration und Querv! ernetzung gezeigt werden, dass je zwei 66.3-kDa-Proteine als funktionell stabiler Homodimer aus jeweils 2-3 Untereinheiten vorliegen. Durch Kristallisation des 66.3-kDa-Proteins konnten Röntgenbeugungsmuster generiert werden, mit deren Hilfe die dreidimensionale Struktur des Proteins aufgelöst wurde. Der Vergleich der dreidimensionalen Struktur des 66.3-kDa-Proteins mit bereits bekannten Proteinstrukturen konnte auf Grund der charakteristischen Anordnung der Peptidkette in einer αββα-Konformation die Zugehörigkeit des 66.3-kDa-Proteins in die Superfamilie der Ntn-Hydrolasen (Enzymklasse 3.5.1) zeigen und eine hydrolytische Funktion im Lipid-Stoffwechsel bei der Spaltung von linearen, nicht-peptidischen Amidbindungen vorhersagen. Mögliche Substrate für das 66.3-kDa-Protein wären somit u. a. verschiedene N-Acylethanolamide oder Sphingosine, sowie hydrophobe Proteinmodifikationen mit Amidbindungen wie die N-Myristoylierung, Glypiation oder Lysin-Acetylierung.

Author dc:creator

• Kettwig, Matthias

Contributors dc:contributor

• Lübke, Torben Prof. Dr.
• Steinfeld, Robert Prof. Dr. Dr.

• 610 Medizin, Gesundheit
• Medicine
• Lysosom
• lysosomale Proteine
• 66.3-kDa-Protein
• autokatalytische Prozessierung
• Protein-Kristallisation
• Ntn-Hydrolasen
• lysosomal protein
• 66.3-kDa protein
• autocatalytic processing
• protein crystallization
• Ntn hydrolases
• 44.77
• 42.18
• 35.70
• MED 321: Biochemie {Medizin}

Licence

• https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/

Language dc:language

ger

Identifier

https://dx.doi.org/10.53846/goediss-885
urn:nbn:de:gbv:7-webdoc-2690-0
webdoc-2690
688935443

OAI identifier oai:identifier

oai:ediss.uni-goettingen.de:11858/00-1735-0000-0006-B13A-F