Identification de déterminants de la relation structure-activité du ligand Elabela liant le récepteur APJ par comparaison entre différentes espèces de mammifères

Le récepteur APJ est un récepteur couplé aux protéines G de la classe A capable de lier deux ligands endogènes, l'Apéline (Ape) et l’Elabela (ELA). Au cours des dernières années, l’axe APJ/Ape/ELA a générée beaucoup d’intérêt sur le plan thérapeutique en raison de son rôle dans de nombreux effets physiologiques et notamment dans le contrôle de la pression artérielle et de la fonction cardiaque. Une meilleure compréhension de la structure-activité entre le récepteur APJ et ses ligands endogènes reste pourrait permettre l’optimisation des molécules à des fins thérapeutiques. En effet, même si les données structurales du récepteur APJ liant un analogue d’Ape36 étaient connues au début de notre étude, celles du ligand ELA-32 étaient inexistantes. Une structure du ligand ELA-32 lié à APJ a été obtenue par cryo-EM en 2022, mais les connaissances acquises avec cette structure restent encore limitées à la portion C-terminale d’ELA-32. Il est aussi intéressant de noter que la séquence d’ELA-32 varie fortement entre les espèces .Ainsi, le but de notre étude était d’utiliser un modèle interespèce afin d’identifier les sites d’interactions moléculaires responsable de la signalisation particulière d’ELA-32. À cette fin, nous avons surexprimé les récepteurs APJ de différentes espèces dans les cellules HEK-293 et confirmé, par un essai immuno-enzymatique ELISA, leurs taux d’expression élevés, uniformes et reproductibles. Nous avons aussi déterminé les profils signalétiques induits par l’ELA-32 de différentes espèces par approche de « Bioluminescence Resonance Energy Transfer » (BRET). Cette comparaison entre six espèces nous a poussé à étudier plus en détail le récepteur APJ de mouton puisque son profil signalétique suite à la liaison d’ELA-32 humain est fortement altéré en termes de recrutement de la β-arrestine2. Conséquemment, les essais de radioliaison et BRET avec une nouvelle série de mutants des récepteurs APJ et d’ELA-32 chez l’humain et le mouton ont permis d’identifier la 2e boucle extracellulaire du récepteur APJ comme étant un déterminant essentiel à la liaison et la signalisation du ligand ELA-32. Ces tests nous ont également permis de démontrer que les positions 17 et 22 du ligand ELA-32 sont essentielles pour l’activation maximale du récepteur APJ. En conclusion, cette étude nous a permis d’identifier et de mieux comprendre les interactions d’acides aminés responsables, comparativement à l’Ape13, de l’activation particulière du récepteur APJ par ELA-32.

Name thesis:degree_name

M. Sc.

Level thesis:degree_level

Maîtrise

Discipline thesis:degree_discipline

Pharmacologie

Grantor dc:publisher

Université de Sherbrooke

Year dc:date.issued

2023

Author dc:creator

• Fournier, Justin

Advisors dc:contributor.advisor

• Sarret, Philippe
• Auger-Messier, Mannix

• APJ
• Apéline
• Elabela
• Signalisation
• Agoniste partiel

Licence dc:rights.uri

• http://creativecommons.org/licenses/by/2.5/ca/

Language dc:language.iso

fr

Handle dc:identifier.uri

http://hdl.handle.net/11143/20613

OAI identifier oai:identifier

oai:usherbrooke.scholaris.ca:11143/20613