Efeito da sinvastatina na modulação da expressão de Reck e suas isoformas em células de melanoma humano

Resumo: O melanoma e um tipo de tumor que se origina dos melanocitos, sendo altamente resistente as terapias convencionais, especialmente quando se encontra em condicoes de metastase, o que torna necessario a busca por novas alternativas de tratamento. O processo de metastase, em geral, e facilitado pela acao das metaloproteinases de matriz (MMPs), que degradam a matriz extracelular, favorecendo a invasao. Entre os elementos que podem regular a atividade de MMPs esta RECK, uma glicoproteina ancorada a membrana celular. Tendo em vista que as estatinas sao drogas que inibem a sintese de colesterol e isoprenoides podendo interferir na composicao da membrana das celulas, e tambem que varios trabalhos relatam a acao antitumoral destas drogas, inclusive em linhagens celulares de melanoma, este trabalho avaliou o efeito do tratamento de celulas de melanoma humano (SK-MEL 28) com doses variadas de uma estatina (sinvastatina) em relacao aos niveis de RNAm de RECK (e suas isoformas alternativas de splicing), MMPs e TIMPs e aos processos de proliferacao e viabilidade celular. As analises de viabilidade celular (realizadas pelo metodo de cristal violeta) demonstraram que o tratamento com sinvastatina e capaz de provocar reducao de viabilidade das celulas SK-MEL 28, e que esta reducao e dose e tempo dependente. A analise do ciclo celular (realizada por citometria de fluxo) demonstrou a parada das celulas SK-MEL 28 em G1 com a concomitante diminuicao da quantidade de celulas na fase G2-S e o aumento da porcentagem de celulas na fase Sub-G1, apos 72h de exposicao as diferentes doses de sinvastatina. A analise dos perfis de expressao dos genes de interesse foi investigado atraves de ensaios de PCR quantitativo em Tempo Real. Os resultados indicam que nao ocorre modulacao da expressao da forma canonica de RECK (RECK-A) (tanto de mRNA como de proteina), tampouco das isoformas RECK-D e RECK-I apos o tratamento com o agente antitumoral. Ocorre diminuicao dos niveis de RNAm da isoforma B de RECK, apos o tratamento com 1 e 5ƒÊM de sinvastatina por 72h. Nas mesmas doses de sinvastatina observa-se uma tendencia a diminuicao da expressao de MMP-2, MMP-9 e MT1-MMP, embora nao seja estatisticamente significativa. Tambem ocorre tendencia a reducao da quantidade de transcrito de TIMP-1, ao passo que ha reducao significativa da expressao de TIMP-2 apos tratamento com 5ƒÊM de sinvastatina. Foi ainda verificado que as razoes entre as expressoes relativas de RECK-A/MMP-2 e RECK-B/MMP-2 aumentam significativamente quando as celulas SK-MEL 28 sao tratadas com 1ƒÊM de sinvastatina por 72h, sugerindo que o deslocamento do balanco proteolitico a favor de RECK pode contribuir para as acoes antitumorais exercidas pela sinvastatina. Nossos dados sugerem, ainda, que RECK-A e RECK-B sejam regulados de maneira distinta nas celulas de melanoma (pelo menos apos o tratamento com sinvastatina) e talvez a maior ou menor atividade de MMPs nas celulas possa ser devido a uma acao conjunta destas duas isoformas de RECK. Estas observacoes corroboram com os dados obtidos nesse trabalho que mostram uma tendencia evidente de diminuicao de expressao de todas as MMPs avaliadas (MMP-2, MMP-9 e MT1-MMP) apos o tratamento com a droga.

Author dc:creator

• Barbosa, Fernanda Augusta de Lima

Advisor dc:contributor.advisor

• Winnischofer, Sheila Maria Brochado

• Teses
• Melanoma
• Bioquímica

Language dc:language

Português

Handle dc:identifier.uri

http://hdl.handle.net/1884/22376

OAI identifier oai:identifier

oai:acervodigital.ufpr.br:1884/22376