FUNCTIONAL CHARACTERIZATION OF THE INTERACTION BETWEENP. AERUGINOSA AND DENDRITIC CELLS TRIGGERING THE DIFFERENTIATION OF PATHOGENIC TH1/17 CELLS IN CYSTIC FIBROSIS.

La fibrosi cistica (CF) è una malattia genetica caratterizzata da una risposta infiammatoria cronica ed eccessiva a infezioni polmonari persistenti, prevalentemente causate da Pseudomonas aeruginosa (Pa). Nonostante l’ambiente polmonare ostile generato dalla disfunzione del CFTR, Pa è in grado promuovere una costante attivazione del sistema immunitario innato e adattativo. Infatti, oltre al ruolo pro-infiammatorio dannoso di neutrofili e macrofagi, i linfociti Th1/17 co-produttori di IFN-γ/IL-17 sembrano avere un ruolo patogenico cardine nella CF. Nonostante ciò, la connessione tra l’infezione di Pa e la generazione dei linfociti co-produttori di IFNγ/IL-17 non è mai stata caratterizzata. A tal fine, abbiamo analizzato e isolato i subset di linfociti T da campioni di sangue e polmone di pazienti con CF e di pazienti non-CF mediante citofluorimetria, ed è stato analizzato il profilo trascrittomico dei subset isolati tramite RNA-Seq. La loro attività patogenica è stata valutata utilizzando co-colture di cellule epiteliali polmonari tramite immunofluorescenza e dosaggio delle citochine. Inoltre, è stata utilizzata una libreria di isolati clinici di P. aeruginosa per valutare la risposta infiammatoria mediata da Pa, e un saggio di antigen-specificity per indagare se Pa inducesse direttamente il trans-differenziamento dei linfociti protettivi cTh17 in patogenici co-produttori di IFNγ/IL-17. I nostri dati dimostrano che i subsets patogenici (Th1/17+ e pTh17) sono significativamente e selettivamente arricchiti nei polmoni dei pazienti CF cronicamente infetti da Pa, al contrario i Th1 e cTh17 protettivi sono significativamente ridotti. L’analisi comparativa dei dati di trascrittomica ha rivelato un profilo molecolare distinto e specifico subset patogenici infiltranti il polmone. Inoltre, i linfociti patogenici Th1/17+ e pTh17, ma non i protettivi cTh17, inducono un danno epiteliale diretto in vitro. Rispetto al ceppo di laboratorio PAO1, i ceppi clinici di Pa inducono il rilascio significativamente maggiore di IL-1β e IL-23 dalle cellule dendritiche, correlate al differenziamento dei subset patogenici. Inoltre, il trans-differenziamento dei linfociti patogenici co-produttori di IFN-γ/IL-17 dai linfociti cTh17 è notevolmente promosso dai ceppi clinici di Pa, senza differenze tra ceppi precoci e tardivi. Nel corso del trans-differenziamento, i linfociti co-produttori di IFN-γ/IL-17 aumentano l’espressione dei fattori di trascrizione CEBP-δ e PPAR-γ, coerentemente con i risultati dall’analisi trascrittomica. Nel complesso, i nostri risultati indicano che i ceppi clinici di Pa promuovono la generazione dei linfociti co-produttori di IFN-γ/IL-17 patogenici, inducendo inoltre una riprogrammazione trascrittomica. Decifrare i meccanismi molecolari alla base della generazione dei linfociti patogenici, dipendente da Pa, potrebbe portare alla scoperta di cruciali bersagli batterici e immunologici che potrebbero essere utilizzati per lo sviluppo di nuove strategie terapeutiche più efficaci nella CF.

Grantor dc:publisher

Università degli Studi di Milano

Year dc:date

2026

Author dc:creator

• CONTE, GIANMARCO

Contributors dc:contributor

• tutor: M. Paroni ; coordinatore: S. Ricagno
• G. Conte
• PARONI, MOIRA
• RICAGNO, STEFANO

• Microbiology
• Immunology
• Cystic Fibrosi
• Host-Pathogen Interaction
• Pathogenic T cells
• Settore BIOS-15/A - Microbiologia

Statement dc:rights

• info:eu-repo/semantics/embargoedAccess
• license:Creative commons
• license uri:http://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/

Language dc:language

eng

Handle dc:identifier

https://hdl.handle.net/2434/1212516

OAI identifier oai:identifier

oai:air.unimi.it:2434/1212516