ROLE OF POLO KINASE CDC5 IN DNA DAMAGE PROCESSING AND REPAIR PATHWAY CHOICE.

Le Polo-chinasi (Polo-Like Kinases; PLK) sono regolatori del ciclo cellulare in tutti gli eucarioti e sono state implicate nel mantenimento della stabilità genomica. La scelta ed efficienza dei meccanismi di riparazione del DNA dipendono dalla progressione nel ciclo cellulare, ma i meccanismi molecolari di questa regolazione sono ancora poco noti. Questa tesi riporta la caratterizzazione del ruolo di Cdc5, unica PLK in S. cerevisiae, nella riparazione di Double-Strand Breaks (DSBs). Per questo studio ho introdotto l’allele ipomorfico cdc5-T238A in ceppi in grado di riparare DSBs tramite meccanismi di riparazione unici. I dati raccolti dimostrano che l’attività chinasica di Cdc5 è fondamentale nella via Break-Induced Replication (BIR), una via di ricombinazione omologa in cui una bolla replicativa migrante estende un intermedio D-loop per migliaia di kilobasi. Mutanti cdc5-T238A mostrano un difetto iniziale di BIR, poiché non riescono ad avviare la sintesi del DNA dal D-loop. L’allele cdc5-T238A mostra anche una ridotta presenza del filamento Rad51-ssDNA al sito di invasione, ma è competente a reclutare Rad51 sul DNA a singolo filamento. I risultati escludono che il difetto di BIR sia dovuto a una resezione del danno alterata o a un problema di adattamento al danno nei mutanti cdc5-T238A. La delezione della elicasi/traslocasi Srs2 sopprime completamente il difetto della mutazione cdc5-T238A nell'estensione del D-loop e la delezione simultanea di Srs2 e Rad55, cofattore di Rad51, rimuove la necessità di un allele CDC5 funzionale in BIR. Infine, riporto la prima identificazione di interazioni per Doppio Ibrido tra Cdc5 e Rad51, Rad55, Rdh54 e Srs2, fattori critici nella maturazione dei filamenti presinaptici e nel metabolismo del D-loop. In conclusione, questa tesi amplia la conoscenza del ruolo delle Polo-chinasi nella riparazione del DNA. Queste chinasi sono comunemente deregolate in molti tipi tumorali e la loro inibizione è oggetto di studio nella terapia antitumorale. La scoperta del coinvolgimento di Cdc5 nella via di BIR propone un collegamento tra la deregolazione delle PLKs e i riarrangiamenti cromosomici dovuti a BIR osservati in cellule tumorali. Infine, come parte di un progetto collaterale, ho impiegato mutanti separatori di funzione di Srs2 per studiare il suo coinvolgimento in diverse fasi della BIR.

Grantor dc:publisher

Università degli Studi di Milano

Year dc:date

2025

Author dc:creator

• DI TERLIZZI, MATTEO

Contributors dc:contributor

• supervisore: A. Pellicioli ; coordinatore: S. Ricagno
• M. DI TERLIZZI
• PELLICIOLI, ACHILLE
• RICAGNO, STEFANO

• Polo-Like Kinase
• Break-Induced Replication
• Saccharomyces cerevisiae
• Srs2
• Rad51
• Homologous Recombination
• DNA damage
• DNA repair
• Settore BIOS-08/A - Biologia molecolare

Statement dc:rights

• info:eu-repo/semantics/embargoedAccess

Language dc:language

eng

Handle dc:identifier

https://hdl.handle.net/2434/1147399

OAI identifier oai:identifier

oai:air.unimi.it:2434/1147399