Funktionelle Analyse von Dendrin : zellbiologische Untersuchungen und Inaktivierung des Dendrin-Gens der Maus

Dendrin ist ein Protein von 707 Aminosäuren, das in Säugern von erregenden Prinzipalneuronen der Großhirnstrukturen (Großhirnrinde, Hippokampus, Amygdala, Striatum) exprimiert wird. Die mRNA, die für Dendrin kodiert, wird in die Dendriten der Neuronen transportiert. Wie bei den wenigen anderen bekannten dendritischen mRNAs nimmt man auch für Dendrin mRNA an, daß der mRNA-Transport in die Dendriten erfolgt, um auf spezifische synaptische Signale hin lokal Protein herzustellen. Die Funktion von Dendrin ist bislang unbekannt. Im Rahmen dieser Arbeit wurden über homologe Rekombination in embryonalen murinen Stammzellen Mäuse hergestellt, die Dendrin nicht mehr exprimieren. Diese Dendrin-defizienten Tiere zeigten allerdings kein auffälliges Erscheinungsbild und trugen somit zum Verständnis der Funktion Dendrins leider nicht viel bei. Um dennoch funktionelle Information über Dendrin zu erhalten, wurden Vektoren zur Expression von EGFP-markiertem Dendrin hergestellt. Durch Transfektion dieser Vektoren in verschiedenen eukaryontischen Zellinien konnte die zelluläre Verteilung des Proteins mit Hilfe von Fluoreszenzmikroskopie verfolgt werden. Es wurde beobachtet, daß Dendrin in den Zellkern transportiert wird. Dies konnte durch die Anwesenheit einer Kernlokalisierungssequenz in Dendrin, die von einem Computerprogramm vorhergesagt wurde, erklärt werden. Durch Expression von EGFP-markierten Teilkonstrukten Dendrins konnte die für den Kerntransport verantwortlichen Sequenzen eingeengt werden. Weiterhin konnte gezeigt werden, daß das Dendrin-Protein einem vesikulären Transport zwischen Soma und Zellperipherie unterliegt, an dem wahrscheinlich Mikrotubuli und das Motorprotein Dynein beteiligt sind. Diese Ergebnisse unterstützen ein Modell, nach dem Dendrin in Dendriten von Neuronen lokal translatiert, anschließend als komplettes Protein oder als trunkiertes Produkt in den Kern transportiert wird, wo es dann vermutlich an einem genregulatorischen Prozess beteiligt ist.

Level thesis:degree_level

thesis.doctoral

Grantor dc:publisher

Universität Heidelberg

Year

2000

Author dc:creator

• Schippling, Susanne

Contributors dc:contributor

• Seeburg, Peter H.,

Repository record source_url

http://www.ub.uni-heidelberg.de/archiv/1397

OAI identifier oai:identifier

oai:archiv.ub.uni-heidelberg.de:1397