Identifikation und Analyse differentiell exprimierter Proteine und Gene während der Thymozytenentwicklung

Die Entwicklung von abT-Zellen im Thymus ist geprägt von äußerst komplexen Selektions- und <br>Differenzierungsprozessen, welche die Entstehung funktioneller und selbsttoleranter T-Zellen <br>gewährleisten. Diese komplexen Vorgänge gehen mit einer veränderten Expression multipler <br>Gene und Proteine einher. Die Signale, welche die Entwicklung im Thymus steuern, sind noch <br>weitgehend unbekannt und ein umfassendes Modell ist noch nicht etabliert. In zwei <br>komplementären Ansätzen wurde im Rahmen dieser Arbeit versucht, Gene die im <br>Zusammenhang mit der positiven und negativen Selektion der Thymozyten moduliert werden zu <br>identifizieren. <br>Durch Immunisierung von Hühnchen mit Thymozyten eines intermediären <br>Entwicklungsstadiums (CD69 positiv) wurde eine spezifische Immunantwort gegen Proteine <br>dieser Entwicklungsstufe induziert. B-Zellen wurden isoliert und die Genloci für die variablen <br>Domänen der schweren und der leichten Kette von Immunglobulinen für die Klonierung von <br>scFv-Phagen-Antikörperbibliotheken verwendet. Innerhalb von drei Selektionsrunden konnten <br>spezifische, auf Thymozyten bindende Phagen in der Bibliothek sehr stark angereichert werden. <br>Die Analyse monoklonaler scFv-Phagen (single chain fragment variable) zeigte ein diverses <br>Repertoire, dessen Antikörperfragmente in durchflußzytometrischen Analysen zum Teil <br>differentiell exprimierte Antigene auf murinen Thymozyten und peripheren T-Zellen erkannten. <br>Western Blot Analysen zeigten, daß mehrere dieser Klone spezifisch für unterschiedliche <br>Proteine waren. <br>In einem zweiten Ansatz konnten durch Gen-Chip Analysen von drei aufeinanderfolgenden <br>Entwicklungsstadien der Thymozyten Expressionsprofile von Genen erstellt werden, die mit den <br>Prozessen der positiven oder negativen Selektion moduliert werden. Die Gen-Chip Daten von <br>zehn dieser Gene wurden durch Echtzeit-PCR Analysen validiert und bestätigt. Durch <br>vergleichende Analysen der Expressionsprofile von Thymozytensubpopulationen aus Wildtyp- <br>Mäusen mit der

Author dc:creator

• Knapp, Bertram

Contributors dc:contributor

• Weltzien, Hans-Ulrich

• positive Selektion
• negative Selektion, scFv

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