Entwicklung von PCR-Assays und Reportergensystemen für das Studium der genetischen Variabilität und der Genregulation in Helicobacter pylori

Das Bakterium Helicobacter pylori hat spezifische Anpassungsmechanismen für die Besiede-lung des menschlichen Magens und die dortige Persistenz entwickelt. <br>Ein Hauptcharakteristikum ist die hohe genetische Variabilität unterschiedlicher Isolate. Im ersten Teil der vorliegenden Arbeit wurde am Beispiel der intergenischen Region vor dem <br>ribA-Gen erstmals gezeigt, daß Polymorphismen in nicht kodierender DNA zur genetischen Diversität von H. pylori beitragen und eine molekularbiologische Differenzierung ermöglichen. Die Analyse der variablen DNA-Region in 487 H. pylori-Isolaten mit der PCR sowie der DNA-Sequenzierung zeigte, daß der Polymorphismus auf Insertion von bisher unbekannten DNA-Fragmenten in 20 der Isolate zurückzuführen ist und eine Einteilung der Isolate in fünf Typen ermöglicht. Die individuellen Genotypen erweitern die Möglichkeiten der Stammdiffe-renzierung. Durch Kombination mit DNA-Polymorphismen in anderen nicht kodierenden Re-gionen war es möglich, 140 Isolate 60 Subtypen zuzuordnen, von denen 36 isolatspezifisch waren. Dies zeigt, daß der Polymorphismus vor dem ribA-Gen als stammspezifischer Marker für evolutionäre und epidemiologische Studien geeignet ist. <br>Im zweiten Teil der Arbeit wurden zwei Plasmide konstruiert, die das Studium der Genregula-tion mit Hilfe des Reportergens lacZ ermöglichen. In den Plasmiden wurde das promotorlose lacZ-Gen mit den Antibiotikaresistenzgenen cat und km gekoppelt. Gewährleistet durch die Klonierung chromosomaler DNA-Fragmente vor das lacZ-Gen des Vektors erfolgte die Inser-tion der Reportergenplasmide ins H. pylori-Chromosom nach natürlicher Transformation durch homologe Rekombination. Die genetischen Werkzeuge ermöglichen das Regulationsstudium bekannter Promotoren sowie die Identifizierung von unter bestimmten Bedingungen aktiven Promotoren. Die Anwendung der Plasmide erfolgte durch Etablierung einer Reportergen-mutante im H. pylori-Stamm 1061, die eine Fusion des Reportergens lacZ mit dem ribosoma-len Gen

Author dc:creator

• Schönenberger, Ruth

Contributors dc:contributor

• Kist, Manfred

• Reportergensysteme
• Helicobacter pylori
• Polymerase chain reaction
• genetic diversity
• reporter gene systems
• gene regulation

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