Untersuchung der passiven Kernporenpermeabilität mit Fluoreszenzfarbstoffen in HT29- und HeLa-Zellen

In eukaryonten Zellen sind die in der Kernhülle eingelagerten Kernporen der wesentliche Weg, der dem molekularen Austausch zwischen Zytosol und Kern zur Verfügung steht. Ionen und Moleküle von 10 - 20 kD können frei durch die Kernporen diffundieren, wohingegen größere Moleküle aktiv, d.h. signal- und ATP-abhängig transportiert werden. Kontrovers diskutiert wird die Regulation der Kernporenpermeabilität. Da die Kernhülle als Calcium-Speicher dient, ist eine mögliche Regulation der Kernporendurchlässigkeit als Funktion des Füllungszustandes dieses Calcium-Speichers in den Mittelpunkt des Interesses gerückt. <br>In dieser Arbeit wurde mit Hilfe der Mikroinjektion von dextrangekoppelten Fluoreszenzfarbstoffen und eines konfokalen Laserscanning-Mikroskopes eine solche mögliche Regulation der Kernporendurchlässigkeit an intakten HT29- und HeLa-Zellen untersucht. Die Calcium-Speicher wurden dabei entweder mit Agonisten oder dem Ionophor Ionomycin entleert. Auch ein möglicher Einfluß einer dauerhaft erhöhten [Ca2+]i wurde untersucht. Die in dieser Arbeit vorgestellten Experimente zeigen, daß die Entleerung der Calcium-Speicher keinen Einfluß auf die Kernporendurchlässigkeit hatte. In allen Versuchsanordnungen konnten die dextrangekoppelten Fluoreszenzfarbstoffe ungehindert und ohne signifikanten Unterschied in der Zeitkonstanten (t) in den Kern diffundieren. <br>Diese Daten stehen im Widerspruch zu kürzlich veröffentlichten Ergebnissen, die an isolierten Zellkernen bzw. in auf 0°C gekühlten Zellen eine Erniedrigung der passiven Kernporenpermeabilität nach Entleerung der perinukleären Calcium-Speicher beobachteten.

Author dc:creator

• Kasper, Thomas

Contributors dc:contributor

• Leipziger, Jens

• Kernpore, Calcium-Speicher
• passive Diffusion
• Calcium Regulation
• nuclear pore complex
• flurescence-labelled dextrans
• calcium-store

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