Klonierung, Expression und funktionelle Charakterisierung eines Minirezeptors aus der Domäne II des LDL Receptor Related Protein

Das LDL Receptor Related Protein (LRP) ist ein 600 kD großer multifunktioneller Rezeptor, der in der Leber stark exprimiert wird und Liganden aus dem Lipidstoffwechsel bindet. Zu Beginn dieser Arbeit war die Lage der Bindungsstellen von Liganden des Lipidstoffwechsels im LRP nur unzureichend charakterisiert. Mit der Überexpression der Domäne II als membrangebundenem Minirezeptor in Säugerzellen sollte ein Modell entwickelt werden, mit dem in Zellkulturen die Rolle der Domäne II bei der Rezeptorbindung untersucht werden kann. Mit der Expression des Domäne II-Fragments im Baculoexpressionssystem sollte die Voraussetzung für eine spätere Strukturaufklärung dieser Domäne geschaffen werden. <br>Mit rekombinanten Baculoviren, die ein Konstrukt aus der LRP-Domäne II enthielten, konnte in Insektenzellen der lösliche LRP-Minirezeptor als 200 kD Protein exprimiert werden. Eine humane Zell-Linie mit stabiler Expression des LRP-Minirezeptorkonstruktes konnte etabliert werden. Das receptor associated protein (RAP) bindet an den Minirezeptor und kompetiert die Bindung anderer Liganden. Im Gegensatz zu früher beschriebenen Minirezeptorkonstrukten vermittelt der hier beschriebene Domäne II-Minirezeptor die zelluläre Aufnahme und Degradation von Alpha-2-Makroglobulin. Es konnte erstmals gezeigt werden, dass der ApoE-Gehalt von VLDL aus dem Plasma normolipidämischer Personen ausreichend ist, um eine Bindung an die Domäne II des LRP zu vermitteln. Ebenfalls erstmals wurde Lipoprotein(a) als Ligand für die Domäne II des LRP identifiziert, die Ligandenbindung erfolgt spezifisch über das Apo(a). <br>Das Konstrukt aus der cDNA der Domäne II repräsentiert somit die vollständige funktionelle Einheit der zweiten ligandenbindenden Domäne des LRP. Die Optimierung der Baculoexpression dieses Konstruktes mit dem Ziel einer größeren Ausbeute der Expression soll in Zukunft

Author dc:creator

• Schlemmer, Erika

Contributors dc:contributor

• Neuhaus, Gunther

• LDL-receptor-related-protein LRP
• receptor associated protein RAP
• Minirezeptor
• Alpha-2-Makroglobulin
• Alpha-2-macroglobulin
• lipoprotein lp (a)
• minireceptor
• very-low-density-lipoproteins

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