Avaliação dos efeitos da N-acetilcisteína sobre o estresse oxidativo induzido por soro urêmico em células vasculares

Resumo: O acúmulo de toxinas urêmicas no plasma de doentes renais está relacionado a um estresse oxidativo sistêmico. Uma vez que a doença cardiovascular (DCV) é a principal causa de morte na doença renal crônica (DRC) e as células vasculares estão em contato direto com toxinas urêmicas acumuladas no sangue desses pacientes, o presente estudo visou investigar o papel da uremia na indução de estresse oxidativo em células vasculares, bem como o efeito do antioxidante N-acetilcisteína (NAC) na inibição de tal estresse e seus efeitos. Pools de soros humanos urêmico e não urêmico foram coletados e caracterizados. A diminuição dos níveis de tióis e o aumento nos níveis de carbonilas no soro urêmico confirmaram o estresse oxidativo sistêmico na doença renal. Células endoteliais (RAEC) e musculares lisas de aorta de coelho (RASM) foram cultivadas com 10% dos pools. O soro urêmico induziu um aumento de 23,5% e 25,6% na produção de superóxido após 3 e 24h, respectivamente, comparado ao soro não urêmico, determinada pela oxidação da dihidroetidina (DHE). Esta produção de superóxido está relacionada a NADPH oxidase, uma vez que a pré-incubação com apocinina, um inibidor desta oxidase, inibiu 41,5% a detecção do hidroxietídeo. A utilização da sonda Mitosox Red mostrou que mitocôndria também contribui para a produção de superóxido estimulada pelo soro urêmico em células vasculares em um período de 24 horas de exposição, aumentado em cerca de 15%. Quanto à biodisponibilidade de óxido nítrico, os resultados obtidos demonstraram que a liberação de NO esteve aumentada em células endoteliais e musculares lisas após 3 horas de tratamento (33,4%), indicados pela reação de NO produzido com a sonda DAF-2DA. Este fato sugere que o soro urêmico, nesse tempo, pode afetar a produção do NO, podendo estar relacionado ao desenvolvimento de aterogênese em doentes renais crônicos. Os efeitos crônicos da uremia no sistema de defesa antioxidante foram investigados pela determinação da razão de GSHtotal/GSSG, através do método colorimétrico por DTNB, após 3, 6 e 24 horas de tratamento. Comparado ao soro não urêmico, foi observada uma diminuição nessa razão em 6 horas de tratamento (33,4%), indicando uma queda na defesa antioxidante e um favorecimento do produto oxidado, demonstrando que a produção de radicais livres é particularmente prejudicial neste contexto. Foi verificada também a modificação de proteínas celulares na presença do soro urêmico, a primeira através de imunoflorescência indireta, no qual se observou um aumento na nitração de proteínas durante 3 e 24 horas em relação ao soro não urêmico, e na segunda através de um ensaio colorimétrico por dinitrofenil hidrazina (DNPH), no qual a produção de carbonilas protéicas também apresentou-se aumentada nos períodos de 3 e 24 horas quando expostas à uremia. Efeitos antioxidantes de NAC puderam ser observados neste estudo, uma vez que reduziu a produção de superóxido, evidente em 24 horas de exposição ao soro urêmico (81,5%), semelhantemente à apocinina, a produção de peróxido de hidrogênio (40%), de óxido nítrico (41,4%) e seus efeitos como a nitração de proteínas, bem como a carbonilação protéica (40,6%). Estes resultados confirmam o estresse oxidativo induzido pelas toxinas urêmicas, indicando alguns mecanismos envolvidos. Também, mostram que a administração de NAC é potencialmente útil na prevenção tanto de produção de ROS/RNS como na inibição dos danos oxidativos em doentes renais crônicos, sendo visto como um promissor agente terapêutico direcionado a conter complicações decorrentes da uremia.

Author dc:creator

• França, Karime Cruz

Advisor dc:contributor.advisor

• Nakao, Lia Sumie

• Dissertações
• Insuficiencia renal crônica
• Stress oxidativo
• Acetilcisteína
• Citologia e biologia celular
• Biologia molecular

Language dc:language

Português

Handle dc:identifier.uri

http://hdl.handle.net/1884/35412

OAI identifier oai:identifier

oai:acervodigital.ufpr.br:1884/35412