Charakterisierung der Endonuklease Ivon Escherichia coli K-12 und Anwendung des Enzyms in einembakteriellen Suizidsystem

Es wurde ein Selbstmordsystem für Bakterien entwickelt, das eine kontrollierbare Zelltötung, eine Zerstörung zellulärer DNA, eine hohe Stabilität und eine vielseitige Anwendbarkeit verbindet. Die Endonuklease I von Escherichia coli wurde charakterisiert und entweder als alleinige Tötungsfunktion oder in Kombination mit der extrazellulären Nuklease von Serratia marcescens verwendet. In dem Suizidsystem werden die signalpeptid-deletierten Nukleasegene vom Lambda-PL- Promoter kontrolliert. Eine thermoinduzierte Expression verringerte das Zellüberleben auf 10-5 - 10-6 und mehr als 90% der DNA wurde ohne erkennbare Zellyse zu säurelöslichem Material degradiert. Die meisten Überlebenden (85%) waren genauso thermosensitiv wie der Ausgangsstamm. Nur wenige Zellen entkamen dem Tötungsprozeß dauerhaft, da der hok/sok-locus des Plasmids R1 die Segregantenhäufigkeit ohne Selektion minimierte (0,002% nach 67 Generationen) und die Rate suizidresistenter Mutanten sehr niedrig war (10-9 pro Zelle und Generation). Eine Kassette wurde konstruiert, die die Integration des Suizidsystems in beliebige Vektoren und eine Erprobung in verschiedenen Organismen ermöglicht.

Level thesis:degree_level

thesis.doctoral

Grantor dc:publisher

Universität Oldenburg

Year

1998

Author dc:creator

• Jekel, Manfred

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