Isolation and characterisation of synaptic vesicles from mouse brain

Alle Eukariotischen Zellen führen einen konstanten Transport von Membranekomponenten duch Vesikel zwischen den Subzellulären Kompartimenten durch. Ein klassichen Beispiel für diesen Transport sind synaptische Vesikel, welche eine wichtige Rolle in der Ausschüttung von Neurotransmitter spielen. Biochemische Analysen von Aufgereinigten synaptischen Vesikeln war von Bedeutung, für die Identifikation und Verständniss der involvierten Proteine in der Membrane Fusion und Aufnahme von Neurotransmittern. Mehrere Protokolle für die Aufreinigung der synaptischen Vesikel auf tierischem Gerhirn wurden etabliert. Einige Protokolle die zu sher sauber aufgereinigten Vesikeln fürhten hatten den Nachteil das die Ausbeute sehr gering war. Hier beschreibe Ich eine Verbesserte Methode zur Aufreinigung von synaptischen Vesikeln, bei dem sehr geringes Ausgangsmaterial benötigt wird. Diese Methode setzt Etablierte Fraktionierungstechnicken, wie Differentielle zentrifugation, rate-zonal Zentrifugation und Chromatographie techniken ein. Diese Protokoll ist optimiert hinsichtilich der Ausbeute an synaptischen Vesikeln während der Aufreinigung, wobei die Sauberkeit der finalen Vesikel Fraktion mit der durch etablierte Protokolle gewonnen Vesikelfraktion vergleichbar ist. Ein weitere Vorteil diese methode ist die Zeitersparniss gegenüber klassicher Methoden. An Hand von Immunoblots und Elektronenmikroskopischen Aufnahmen kann die Sauberkeit der gewonnen Vesikel Fraktion gezeitgt werden. Durch den Einsatz an gerimgem Ausgangsmaterial, können synaptische Vesikel auf Transgenen Mäusen isoliert und die Neurotransmitterfreisetzung im Detail untersucht werden. Zu diesem zewck wurden synaptische Vesikel auf Rab-GDI knock-out Mäusen isolierten und deren Biochemischen und Physikalischen Parameter analysiert.

Author dc:creator

• Ahmed, Saheeb

Contributors dc:contributor

• Jahn, Reinhard Prof. Dr.
• Brose, Nils Prof. Dr.
• Neher, Erwin Prof. Dr.

• 500 Naturwissenschaften
• Biologie
• Synaptische Vesikel
• Neurotransmitter
• SNARE´s
• Fusion
• Synaptic vesilces
• 42.15
• WA 000: Biologie

Licence

• https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/

Language dc:language

eng

Identifier

https://dx.doi.org/10.53846/goediss-485
urn:nbn:de:gbv:7-webdoc-3085-2
webdoc-3085
668679506

OAI identifier oai:identifier

oai:ediss.uni-goettingen.de:11858/00-1735-0000-0006-AE1B-8