Universität Tübingen
Etablierung und Evaluierung einer vollautomatisierten HCMV-DNA-Extraktionsmethode mittels MagNA Pure, quantitative Amplifizierung mittels COBAS Amplicor und klinische Anwendung in einer Phase I/II- Studie
Abstract
Die PCR gewinnt in der Medizin und insbesondere im Bereich der Routinediagnostik immer mehr Bedeutung. Für die Amplifikation und Detektion pathogenspezifischer Nukleinsäuren wurden mittlerweile zahlreiche automatisierte Systeme entwickelt. Die zuvor erforderliche Extraktion der Nukleinsäuren wird jedoch in den meisten Labors weiterhin von Hand durchgeführt, ist arbeits- und zeitaufwendig und stellt hohe technische Anforderungen an das Laborpersonal. Die Probenvorbereitung stellt heute in den meisten molekularen Assays die Schwachstelle dar. Die volle Automatisierung ist erforderlich, um menschliche Fehler zu vermeiden, Genauigkeit und Reproduzierbarkeit der Ergebnisse zu verbessern, das Verfahren zu standardisieren und die Analyse größerer Probenzahlen zu ermöglichen. Ferner könnten Arbeitszeit und damit auch Kosten eingespart werden. In dieser Arbeit wurde die Nukleinsäurenextraktion mittels des MagNA Pure LC Systems mit der quantitativen PCR im COBAS Amplicor verknüpft, um einen vollautomatisierten DNA-Nachweis von humanen Cytomegalieviren zu ermöglichen. Um die Kompatibilität der beiden Systeme und die Vergleichbarkeit der Extraktion im MagNA Pure LC mit der Handextraktion zu belegen, wurden im Direktvergleich parallel 90 klinische Proben analysiert. Ferner wurden im vollautomatisierten Protokoll Verdünnungsreihen getestet. Dabei wurde deutlich, dass die Extraktion im MagNA Pure nur etwa halb so effizient ist, wie die Handextraktion. Auf die ermittelten Viruslasten hatte das aber keinen Einfluss, die Ergebnisse zeigten eine gute Übereinstimmung. Sensitivität, Spezifität, Reproduzierbarkeit und Linearität des vollautomatisierten Verfahrens waren dabei absolut vergleichbar mit der konventionellen Methode. Ferner konnte, bei geringen zusätzlichen Kosten pro Probe, für die erforderliche Handarbeit ein enormer Zeitgewinn erzielt werden. Außerdem wurden in einer kleinen klinischen Studie im Rahmen der antiviralen präemptiven Therapie nach hämatopoetischer Stammzelltransplantation 262 Patientenproben analysiert. Die gute Eignung des vollautomatisierten Verfahrens für die Routinediagnostik konnte diesbezüglich gezeigt werden.
Author and committee
dc:creator, dc:contributor.*- Author
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- Gentner, Timo
Identifiers
dc:identifier.*- Identifier
- hdl:10900/44565