Universität Tübingen
Expression des protein inhibitor of nitric oxide synthase in der Retina adulter Ratten
Abstract
Das Axotomiemodell des Nervus opticus dient als Paradigma für Nervenverletzungen im zentralen Nervensystem von adulten Säugetieren. Innerhalb von zwei Wochen nach Transektion des optischen Nerven kommt es zu einem Zellverlust von 80-90% der retinalen Ganglienzellen. Erhöhte Neurotrophinspiegel in der Retina reduzieren die Zahl des überwiegend apoptotischen Zelluntergangs. Intravitreal verabreichte Radikalfänger, die den Auswirkungen einer erhöhten Produktion von Stickstoffmonoxid (NO) unter der Neurotrophingabe entgegenwirken, vermögen diesen apoptotischen Zelluntergang zu inhibieren. NO-Konzentrationen im ZNS werden zu einem Großteil durch das NO-produzierende Enzym Stickstoffmonoxidsynthase (NOS) reguliert. Die Aktivität von NOS kann durch den protein inhibitor of nitric oxide synthase (PIN) reduziert werden. Zielsetzung dieser Arbeit ist zu klären, ob durch vermehrte Expression von PIN in überlebenden retinalen Ganglienzellen auf das Trauma der Axotomie reagiert wird. In der vorliegenden Arbeit wird die Expression PINs zwischen axotomierten und Kontrollretinae adulter Ratten verglichen. Mittels mRNS-Sonden und monoklonalen Antikörpern wird die schichtenspezifische Verteilung der PIN-mRNS bzw. des PIN-Proteins in der Retina lokalisiert. Durch semiquantitive-, Echtzeit-PCR und Western blots werden zeitliche und quantitative Bestimmung der Expression- und Translationsmuster untersucht. In Kolokalisationsexperimenten mit PIN- und nNOS-Antikörpern wird deren räumliche Verteilung in der Retina dargestellt. Sowohl axotomierte (ARe) als auch Kontrollretinae (KRe) zeigen die stärkste Akkumulation von PIN-mRNS in der retinalen Ganglienzellschicht und in der inneren Körnerzellschicht. Eine vermehrte Expression PINs in den einzelnen Ganglienzellen von ARe im Vergleich zu KRe ist nicht nachweisbar. Die quantitative Bestimmung der mRNS von ARe und KRe zu den Zeitpunkten 6 h, 12 h, 1 d und 3 d mittels PCR zeigt in Übereinstimmung mit den Befunden aus der ISH keine wesentlichen Expressionsunterschiede. Durch immunhistochemische Doppelfärbung mit Antikörpern gegen PIN und neuronaler NOS konnten beide Proteine in retinalen Ganglienzellen kolokalisiert werden. Aus den immunhistochemischen Experimenten und Western blots liegen keine Hinweise auf eine vermehrte Expression des PIN-Proteins in ARe vor. Die Einordnung der Ergebnisse und PINs eventuell zusätzliche Beteiligung am Dyneinmotorkomplex werden vorgestellt und diskutiert. Für eine vermutete Hochregulation PINs in retinalen Ganglienzellen nach Axotomie geben weder die vorliegenden Daten auf mRNS- noch auf Proteinebene einen Anhalt.
Author and committee
dc:creator, dc:contributor.*- Author
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- Schott, Michael
Identifiers
dc:identifier.*- Identifier
- hdl:10900/44410