Verbesserung des CVB3-Maus-Myokarditismodells durch die Entwicklung pankreasattenuierter Coxsackieviren
type: CreativeWork
description: Das Coxsackievirus B3 (CVB3)-Maus-Myokarditismodell wird standardmäßig zur Untersuchung der Virus-induzierten Myokarditis verwendet. Entgegen der CVB3-Infektion im Menschen stellt im murinen Organismus nicht das Herz, sondern das Pankreas das für die CVB3-Infektion suszeptibelste Organ dar. Verschiedene klinische Symptome, wie der starke Gewichtsverlust, das schmerzhafte Hochziehen des Bauches sowie schnell auftretende Todesfälle, können als direkte Folge der virusbedingten akuten Pankreatitis angesehen werden. Diese fulminante Ausprägung der Pankreatitis stellt für die Tiere eine extreme Belastung dar, welche sich von der humanen Präsenz unterscheidet. Im Fokus der vorliegenden Arbeit stand die Verbesserung des CVB3-Maus-Myokarditismodells durch die Entwicklung einer genetisch modifizierten CVB3-Variante, welche durch die Insertion von microRNA-Zielsequenzen (microRNA-Target Sites, miRNA-TS) eine Pankreasattenuation aufweist. Die Expressionsanalyse von miRNAs im Pankreas und Herz mittels eines Affymetrix miRNA –Chip-Assays sowie quantitativer RT-PCR zeigte, dass die miRNA-375 die stärkste Expression im Pankreas aufwies und nur geringfügig im Herzen exprimiert wird. Darauf basierend wurden drei Kopien der miRNA-375TS in das 3’ -bzw. 5’-Ende des Genoms der CVB3-Variante rCVB3.1, jeweils in positiver bzw. negativer Orientierung, inseriert. Die Analyse der daraus resultierenden vier rekombinanten CVB3-Varianten in vitro zeigte, dass die virale Replikation über die Insertion der miRNA-TS in positiver Orientierung in die 3’-UTR des Genoms (Virusvariante: CVB3-375TS(3+)) am effektivsten durch die miRNA-375 unterdrückt wurde. In der pankreatischen Zelllinie EndoC-βH1 wurde, verglichen mit dem keine TS-Sequenzen enthaltenden Kontrollvirus, die Replikation von CVB3-375TS(3+) durch die endogene miRNA-375 Expression ca. um vier log10-Stufen verringert. In isolierten primären embryonalen Kardiomyozyten wurde CVB3-375TS(3+) hingegen nicht unterdrückt. Für die in vivo Versuche wu…
abstract: Das Coxsackievirus B3 (CVB3)-Maus-Myokarditismodell wird standardmäßig zur Untersuchung der Virus-induzierten Myokarditis verwendet. Entgegen der CVB3-Infektion im Menschen stellt im murinen Organismus nicht das Herz, sondern das Pankreas das für die CVB3-Infektion suszeptibelste Organ dar. Verschiedene klinische Symptome, wie der starke Gewichtsverlust, das schmerzhafte Hochziehen des Bauches sowie schnell auftretende Todesfälle, können als direkte Folge der virusbedingten akuten Pankreatitis angesehen werden. Diese fulminante Ausprägung der Pankreatitis stellt für die Tiere eine extreme Belastung dar, welche sich von der humanen Präsenz unterscheidet. Im Fokus der vorliegenden Arbeit stand die Verbesserung des CVB3-Maus-Myokarditismodells durch die Entwicklung einer genetisch modifizierten CVB3-Variante, welche durch die Insertion von microRNA-Zielsequenzen (microRNA-Target Sites, miRNA-TS) eine Pankreasattenuation aufweist. Die Expressionsanalyse von miRNAs im Pankreas und Herz mittels eines Affymetrix miRNA –Chip-Assays sowie quantitativer RT-PCR zeigte, dass die miRNA-375 die stärkste Expression im Pankreas aufwies und nur geringfügig im Herzen exprimiert wird. Darauf basierend wurden drei Kopien der miRNA-375TS in das 3’ -bzw. 5’-Ende des Genoms der CVB3-Variante rCVB3.1, jeweils in positiver bzw. negativer Orientierung, inseriert. Die Analyse der daraus resultierenden vier rekombinanten CVB3-Varianten in vitro zeigte, dass die virale Replikation über die Insertion der miRNA-TS in positiver Orientierung in die 3’-UTR des Genoms (Virusvariante: CVB3-375TS(3+)) am effektivsten durch die miRNA-375 unterdrückt wurde. In der pankreatischen Zelllinie EndoC-βH1 wurde, verglichen mit dem keine TS-Sequenzen enthaltenden Kontrollvirus, die Replikation von CVB3-375TS(3+) durch die endogene miRNA-375 Expression ca. um vier log10-Stufen verringert. In isolierten primären embryonalen Kardiomyozyten wurde CVB3-375TS(3+) hingegen nicht unterdrückt. Für die in vivo Versuche wu…
author: Pryshliak, Markian
language: de
license: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
date published: 2019
date modified: 2026-07-27T21:28:35Z
provider: Technische Universität Berlin
publisher: Networked Digital Library of Theses and Dissertations
type: WebPage
source organization: Technische Universität Berlin

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property ID: DOI
value: 10.14279/depositonce-8381