Characterization and Application of Protein Kinase-Responsive Organic Probes with Triplet-Singlet Energy Transfer

Ensüümid on valgud, mis katalüüsivad biokeemilisi reaktsioone. Ensüümid osalevad signaaliülekande- ja ainevahetusradades, mõjutades seeläbi rakkude arengut ja kasvu ning rakkude reaktsioone keskkonnatingimustele. Ensüümide tavapärasest erinev kolmedimensionaalne struktuur, ensüümi lokalisatsioon ja ensüümi aktiivsus rakkudes võib põhjustada organismi haiguslikke seisundeid. Selleks, et muutusi ensüümide struktuuris, paiknemises ja ensüümide aktiivsuses rakkudes saaks detekteerida juba muutuste varajases arengujärgus, on vaja arendada tundlikke mõõtmismeetodeid. Käesolevas töös uuriti süvitsi ühte võimalikku lähenemist ensüümi-tundlike sondide arendamisele. Uurimistöös kasutati Tartu Ülikooli keemia instituudis välja arendatud fotoluminestsentssonde [ARC-Lum(Fluo) sonde], mille luminestsentsomadused muutuvad oluliselt seondumisel proteiinkinaasidele. Kui proteiinkinaasidele seondunud ARC-Lum(Fluo) sonde ergastada ultravioletse kiirgusega, siis emiteerivad need pikaealist fotoluminestsentskiirgust, mille eluiga jääb mikrosekundilisse suurusjärku. ARC-Lum(Fluo) sondide pikk luminestsentsi eluiga kompleksis proteiinkinaasiga võimaldab kasutada kompleksi detekteerimiseks aegviivitusega mõõtmistehnikaid, mis tagavad pikaealise luminestsentsi selge eristamise bioloogiliste proovide autofluorestsentsist, mille eluiga jääb tavapäraselt nanosekundilisse suurusjärku. Ühtlasi on tagatud mõõtmismeetodi hea signaal-müra suhe ning võimaldatud proteiinkinaaside detektsioon väga väikeses kontsentratsioonis. Käesolevas töös uuriti ARC-Lum(Fluo) sondide fotoluminestsentsi omadusi. Lisaks rakendati ARC-Lum(Fluo) sonde proteiinkinaaside seireks elusates rakkudes aegviivitusega luminestsentsmikroskoopia abil. Uurimistöö tulemusi saab kasutada sarnasel põhimõttel disainitud sondide arendamiseks teistele ensüümidele.

Author

• Ligi, Kadri

• ensüümid
• proteiinkinaasid
• luminestsents
• sondid
• enzymes
• protein kinases
• luminescence
• sondes

Identifier

hdl:10062/52400

OAI identifier oai:identifier

oai:dspace.ut.ee:10062/52400