Cartographie de grands fragments d'ADN des chaines Kappa d'immunoglobulines de souris BALB/c

Depuis 1983, plusieurs techniques d'électrophorèse en champ pulsé qui permettent la séparation de très grands fragments d'ADN (50-1000kb ou plus) ont été développées. Parallèlement, la découverte d'enzymes de restriction qui coupent rarement le génome a permis le développement d'une stratégie pour l'étude de très grandes réglons génomiques. L'objectif de cette étude est de déterminer l'organisation du locus IgK autour de la région génétique Ck afin de contribuer à la compréhension des mécanismes de recombinaison VK-Jk et de génération de la diversité des anticorps. Malgré le fait que d'Innombrables études ont tenté, et tentent encore, d'élucider l'organisation du locus IgK de la souris, plusieurs questions restent encore sans réponse. Est-ce que le réarrangement a lieu d'une façon ordonnée? Est-ce qu'il existe un mécanisme quelconque qui assurerait l'expression de tous les gènes Vk? A quoi servirait d'avoir un si grand nombre de gènes Vk (100 à 300) s'ils ne peuvent pas tous être exprimés? Est-ce que la position des gènes VK Influence la fréquence et l'ordre de leur expression? L'établissement de la liaison physique entre les gènes du locus IgK nous permettrait de répondre avec précision à plusieurs de ces questions. A l'aide de la technique d'électrophorèse par Inversion de champ (FIGE pour "Field Inversion Gel Electrophoresis") nous avons établi quatre cartes de restriction de grands fragments d'ADN associées à la région constante Ck de la chaîne légère des Immunoglobulines de souris BALB/c. Au total, environ 2000 kb d'ADN génomique ont été analysés. La stratégie consiste à effectuer une série de clivages simples et doubles d'ADN de haut poids moléculaire, les soumettre à l'électrophorèse FIGE, les transférer sur membrane de nylon et les hybrider avec les quatre marqueurs génétiques d'Intérêt: Ck, Lyt2, Vk21 et VK23. Les Implications de ce genre d'étude pour la compréhension de l'organisation du génome eukaryote sont importantes. Avant la découverte des systèmes électrophorétiques en champ pulsé, de très diverses approches ont été employées pour l'étude du locus IgK depuis longtemps reconnu par sa complexité. Plusieurs hypothèses sur l'ordre de ses gènes sont le résultat de ces efforts. Mais aujourd'hui, la possibilité d'établir une liaison physique entre des gènes séparés par de grandes distances génétiques devient plausible. L'électrophorèse en champ pulsé constitue alors une technique moderne, directe, simple et efficace pour étudier, entre autres, le complexe de gènes qui code pour les immunoglobulines qui s'étend sur une distance génétique d'environ 500-2000 kb et donc naguère inatteignable par les techniques électrophorétiques conventionnelles.

Name thesis:degree_name

M. Sc.

Level thesis:degree_level

Maîtrise

Discipline thesis:degree_discipline

Biochimie

Grantor dc:publisher

Université de Sherbrooke

Year dc:date.issued

1990

Author dc:creator

• Garza, Monica

Advisor dc:contributor.advisor

• Gibson, David

Language dc:language.iso

fr

Handle dc:identifier.uri

http://hdl.handle.net/11143/14419

OAI identifier oai:identifier

oai:usherbrooke.scholaris.ca:11143/14419