Caractérisation des convertases furine/Pace et Pace4 pouvant être impliquées dans la maturation du précurseur proendothéline-1 humain

Les convertases furine/PACE/SPC1 et PACE4 font partie d'une famille de protéases maturant les précurseurs protéiques en polypeptides matures. La furine et PACE4 sont des sérine-protéases résidant dans la voie de sécrétion constitutive des protéines. Elles sont connues pour maturer les précurseurs à des sites Arg-X-Lys/Arg-Arg. La furine est reconnue pour maturer plusieurs précurseurs dont le pro-?-NGF, gp160 de HIV-1, l'antigène protecteur de B. anthracis, le pro-facteur von Willebrand et le pro-TGF?. Les substrats de PACE4 sont inconnus. L'endothéline-1 (ET-1) est un peptide vasoconstricteur très puissant produit par l'endothélium. Composé de 21 a.a., l'ET-1 est issue d'un précurseur de 212 a.a., la préproET-1. Afin de libérer la portion BigET-1, peptide immédiat dans la voie de biosynthèse de l'ET-1, le précurseur doit subir une double protéolyse aux sites Arg-Ser-Lys-Arg52? et Arg-Ser-Lys-Arg92?. Nous proposons que la furine ou PACE4 puissent être impliqués dans la maturation du précurseur de l'ET-1. Les travaux présentés montrent que les cellules endothéliales (CEs) d'aorte bovine expriment l'ARNm de 4.4 kb de la furine et non celui de PACE4. L'infection de cellules BSC 40 avec le recombinant du virus vaccinia vv:hFUR, exprimant la furine, produit une forme sécrétée (80 kDa) de la furine. Cette forme est active et possède un KM et VMAX de 3.4 nmoles/min et 27 µM respectivement avec le substrat boc-Arg-Val-Arg-Arg-4-méthyl-7-amidocoumarine. Ceci est comparable à la forme hFUR713t qui est construite pour être sécrétée et partage toute les caractéristiques enzymatique de la furine native. L'étude montre que la proET-1 recombinante est complètement maturée par la furine qui produit l'intermédiaire BigET-1-Lys-Arg. Cet intermédiaire peut être ensuite converti par la chymosine en ET-1 qui a une activité vasoconstrictrice sur le vas déférent de rat ou la carotide de lapin via le récepteur ETA. PACE4 mature difficilement et de manière différente la proET-1. Lorsque la furine est incubée avec le substrat boc-RVRR-MAC ou la proET-l, l'?1-antitrypsine Portland à 1.0 µg/ml (K1 = 3.6 nM) inhibe entièrement l'activité de la furine. PACE4 n'est pas affectée par cette serpine. Finalement, la production d'ET-1 par les CEs est diminuée de 50 % par le décanoyl-RVKR-chlorométhylcétone à 10 µM, un inhibiteur suicide dirigé contre le site actif des convertases. Ces résultats suggèrent que la furine, et non PACE4, peut être impliquée dans la maturation initiale de la proET-1 en BigET-1.

Name thesis:degree_name

M. Sc.

Level thesis:degree_level

Maîtrise

Discipline thesis:degree_discipline

Pharmacologie

Grantor dc:publisher

Université de Sherbrooke

Year dc:date.issued

1995

Author dc:creator

• Denault, Jean-Bernard

Advisor dc:contributor.advisor

• Leduc, Richard

Language dc:language.iso

fr

Handle dc:identifier.uri

http://hdl.handle.net/11143/14363

OAI identifier oai:identifier

oai:usherbrooke.scholaris.ca:11143/14363