Remodelado de la entrada de calcio en la angiogénesis: papel de las proteínas ORAI1 Y SARAF

La angiogénesis se define como el proceso llevado a cabo por las células endoteliales (CE) por el cual se forman nuevos vasos sanguíneos a partir de otros preexistentes. Su regulación es precisa y está controlada por factores pro-angiogénicos, como el factor de crecimiento vascular endotelial (VEGF). VEGF activa diferentes rutas de señalización que promueven el incremento de las concentraciones de calcio intracelular ([Ca2+]i). Estudios recientes sugieren que el cambio de [Ca2+]i regulado por SOCE, del inglés store-operated calcium entry, tiene un papel fundamental en el proceso de angiogénesis. Sin embargo, siguen siendo escasos los conocimientos sobre el papel que desempeñan en este proceso sus proteínas claves, entre ellas, SARAF, el emergente factor regulador de SOCE, y Orai1, la subunidad formadora del poro de los canales de SOCE. En este estudio demostramos que la inhibición de SOCE usando GSK-7975A (GSK), bloquea el crecimiento de los brotes a partir de anillos de aorta de rata cultivados ex vivo, la migración y la formación de tubos de CE humanas derivadas de la vena umbilical (HUVEC); y afecta significativamente al desarrollo de los vasos de la retina de ratón neonato. Encontramos que Orai1 y SARAF colocalizan en HUVEC y están implicados en el incremento de la [Ca2+]i mediada por VEGF. En esta misma línea, encontramos que la supresión de la expresión de ambas proteínas, usando siARNs, reduce significativamente la formación de tubos, la proliferación y la migración de las HUVEC. Por otra parte, motivados por estudiar la angiogénesis desde un punto de vista traslacional, demostramos que el suero de pacientes que han padecido un infarto severo del corazón con con elevación del segmento ST (STEMI) contiene elevados niveles de VEGF-A e interleuquina 17 A (IL-17A). Además, demostramos que el suero isquémico promueve la formación de tubos y la migración de las HUVEC, así como la atracción de las células tip en cultivo 3D de HUVEC. Igualmente, usando tapsigargina como estímulo de vaciado de reservorios, observamos una exacerbación de SOCE en células tratadas con suero isquémico que se correlacionó con un aumento en la expresión proteica de Orai1. Finalmente, en presencia de suero isquémico, evidenciamos que la inhibición de Orai1 previene la activación de MEF-2A, la migración de las células tip y la expresión de Notch1, Hes1, Hey1 y VEGF-A en HUVEC. Estos hallazgos se corroboraron utilizando suero de ratas sometidas a isquemia/reperfusión (I/R). Nuestros resultados muestran por primera vez la interacción funcional entre SARAF y Orai1 en las CE, remarcan el rol de las proteínas en el proceso de angiogénesis, y relacionan a Orai1 y SOCE con el proceso de angiogénesis post-isquémica.

Author dc:creator

• Galeano Otero, Isabel María

Advisor dc:contributor.advisor

• Smani Hajami, Tarik

Statement dc:rights

• Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional

Licence dc:rights.uri

• http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

Language dc:language.iso

spa

Handle dc:identifier.uri

https://hdl.handle.net/11441/138524

OAI identifier oai:identifier

oai:idus.us.es:11441/138524