Análisis molecular del gen TPSAB1, un gen polimórfico

[ES]Introducción: La triptasa es una serin-proteasa relacionada con la tripsina. El término triptasa comprende al menos cuatro proteasas diferentes: α, ß, γ y δ, que presentan diferencias en cuanto a sus propiedades enzimáticas. Las funciones de esta proteína no han sido completamente dilucidadas, aunque se ha implicado en fenómenos inflamatorios, protección contra la infección y otros fenómenos inmunológicos. La estructura de esta proteína es tetramérica y los genes que las codifican se encuentran agrupados en la posición 16p13.3. Se han descrito mecanismos de regulación transcripcional y post-transcripcionales capaces de modificar los niveles individuales de expresión. Además, a lo largo del gen TPSAB1se han descrito varios polimorfismos . La hipótesis se basa en que las variaciones en la secuencia del gen TPSAB1 podría afectar a los niveles de triptasa y función. Además la identificación de tales modificaciones podría ayudar a explicar los mecanismos por los que dichos cambios en la expresión de triptasa ocurren y la relación con fenotipos específicos. Material y Métodos: Se han estudiado 135 controles con niveles de triptasa inferiores a 11,4 µg/L y 167 pacientes diagnosticados de asma de origen alérgico. Además se incluyeron 4 miembros de una familia con niveles elevados de triptasa: la paciente probando (con clínica abigarrada y en la que se descartó una mastocitosis) y dos hijas y una hermana de aquella, con niveles elevados de triptasa, pero asintomáticas, y el marido de la paciente probando, que presentaba niveles normales de triptasa y se encontraba también asintomático. Las muestras fueron amplificadas a partir de ADN por reacción de PCR con oligonucleótidos previamente descritos; para un análisis más preciso se clonaron muestras representativas. Se estimaron las frecuencias de los sitios polimórficos. Se analizó el RFLP (polimorfismo 363C>T que permite distinguir entre la forma α y ß). Se amplificó el promotor mediante PCR con oligonucleótidos diseñados con el software primer3. Se estudió el impacto de los distintos SNP por medio de análisis in silico. La secuencia proteica fue analizada por análisis in silico. Además, el análisis de expresión se llevó a cabo mediante RT-PCR en los pacientes con triptasa elevada. Resultados y conclusiones: Se ha estudiado el gen TPSAB1, analizándose polimorfismos previamente descritos y describiéndose 19 nuevos polimorfismos en la región del gen comprendida entre el exón 5 y exón 6, estudiada en profundidad por ser altamente polimórfica; otro SNP ha sido descrito en el intrón 1. No se han encontrado diferencias estadísticamente significativas entre el grupo de pacientes y controles en relación a la presencia de la forma α o la ausencia de ésta, si bien se observaron niveles de triptasa inferiores en aquellos individuos con esta forma, lo que se puede relacionar con su secreción constitutiva. En el análisis molecular del gen TPSAB1 en la familia de estudio se ha detectado un patrón de unión de factores de transcripción específico en la región promotora del probando claramente diferenciado del de los controles, y que podría estar relacionado con la elevada expresión de ARNm de la paciente probando. Entre los factores de transcripción detectados destacan MITF y MAZ que se han descrito implicados en el control de la expresión de triptasa en modelos múridos. Se han detectado varios polimorfismos en la secuencia del gen de la triptasa de la paciente probando que modifican el aminoácido codificado en posiciones con implicaciones tanto en la estabilidad como en los motivos de fosforilación. Estas modificaciones podrían estar relacionadas con el fenotipo de la paciente con niveles elevados de triptasa. Describimos por primera vez la existencia de una entidad nosológica para la que sugerimos el término hipertriptasemia familiar, en la que distintos miembros de una misma familia presentan niveles elevados de triptasa sin mastocitosis.

Author

• Hernández Hernández, Laura

• Tesis y disertaciones académicas
• Universidad de Salamanca (España)
• Genética humana
• Bioquímica molecular
• Genética clínica
• Alergia
• Academic dissertations
• Allergy
• Human Genetics
• Molecular biochemistry
• Clinical Genetics

Identifier

hdl:10366/122976

OAI identifier oai:identifier

oai:gredos.usal.es:10366/122976