Plasma rico en factores de crecimiento. Desarrollo y estandarización de su aplicación por vía oftálmica
En el presente trabajo de investigación se aborda el problema no resuelto de los pacientes oftalmológicos que necesitan regenerar tejidos oculares. El abordaje médico de este problema se ha intentado desde hace años con derivados hemáticos, como el suero autólogo, por su composición similar a la de la lágrima. Más recientemente, se ha vivido un auge en la aplicación de derivados plaquetarios, conocidos como plasmas ricos en plaquetas (PRP), en diversas áreas de la medicina, entre ellas la oftalmología, debido al papel de las plaquetas en la reparación y regeneración tisular. Las plaquetas constituyen un importante reservorio de factores de crecimiento claves en la cicatrización tisular. Muchas citoquinas presentes en el plasma y las plaquetas han sido identificadas como esenciales para el mantenimiento de la superficie ocular y por ello resulta atractivo su empleo en oftalmología. Diversos estudios clínicos muestran su potencial efectividad en el tratamiento de patologías de la superficie ocular. Sin embargo, existe una falta de estandarización y adecuación de las preparaciones de PRP para su aplicación ocular, en el presente trabajo se utiliza un PRP estandarizado, el Plasma Rico en Factores de Crecimiento (PRGF). El PRGF es un PRP en el que se induce la degranulación plaquetaria por adición de cloruro cálcico. El PRGF ha demostrado en estudios in vitro e in vivo aumentar la proliferación y migración de células epiteliales y la velocidad de cierre de heridas corneales. El grupo de investigación ha optimizado el procedimiento de obtención y acondicionamiento del PRGF para su aplicación ocular, obteniendo como consecuencia un sistema cerrado con marcado CE que cumple con todos los requerimientos galénicos y regulatorios para su administración por vía oftálmica. En el presente trabajo se ha estudiado la composición del colirio de PRGF, así como su estabilidad a distintos tiempos bajo diferentes condiciones de conservación. Por otro lado se ha caracterizado el efecto biológico del PRGF sobre cultivos celulares de fibroblastos oculares y sobre su diferenciación a miofibroblastos, mecanismo fisiopatológico causante de opacidad o haze corneal. Por último se ha evaluado la aplicación del PRGF a la expansión ex vivo de células madre epiteliales limbares, como suplemento del medio de cultivo celular y como matriz o scaffold para su cultivo y trasplante. Los resultados del presente trabajo muestran que en el colirio de PRGF se logra una concentración plaquetaria que produce un aumento de los niveles de los principales de factores de crecimiento. Su conservación durante 6 meses congelado y posteriormente durante 72 horas refrigerado o a temperatura ambiente no reduce la concentración de estos factores de crecimiento ni su efecto biológico sobre la proliferación de células corneales. Además, el presente trabajo realiza aportaciones originales sobre el papel del PRGF en el aumento de la proliferación y migración de fibroblastos corneales y conjuntivales y previene y revierte la diferenciación de fibroblastos a miofibroblastos, lo que posee importantes implicaciones en el manejo de diferentes patologías que tienen en común la fibrosis o cambio del tejido normal a procesos cicatrizantes que comprometen la función, como fibrosis subepiteliales, opacidades corneales, o presencia tejido cicatricial en zonas como la malla trabecular o en la retina. Como aportación original en terapias avanzadas se ha constatado que la tecnología PRGF permite un abordaje totalmente autólogo aumentando su seguridad y eficiencia; en aplicaciones como:Suplemento del medio de cultivo celular aumentando la proliferación y la capacidad clonogénica de las células epiteliales limbares preservando un estado indiferenciado, fundamental para el éxito del trasplante.Andamiaje o matriz en ingeniería tisular, permitiendo la adhesión y proliferación de células epiteliales limbares manteniendo sus características fenotípicas y permitiendo el crecimiento e implantación celular. Por último la membrana de PRGF presenta unas características mecánicas y manejabilidad adecuadas para su uso quirúrgico en el tratamiento de patologías de la superficie ocular. Con el presente trabajo de investigación se demuestra posible desarrollar e industrializar el Plasma Rico en Factores de Crecimiento para su aplicación oftálmica en medicina regenerativa y terapias avanzadas aplicadas a la superficie ocular y córnea.
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