The application of mercury-containing labels in protein analysis using complementary mass spectrometric techniques
type: CreativeWork
description: En la presente tesis doctoral se desarrollaron nuevas metodologías para el análisis cuantitativo de proteínas basadas en la introducción química de un compuesto de mercurio capaz de unirse a las cisteínas libres de estas biomoléculas. El ácido hidroximercuribenzoico tiene un alto potencial como agente derivatizante, ya que es capaz de actuar de forma selectiva y completa sobre los residuos de cisteína presentes en las proteínas. El objetivo fundamental del proyecto ha sido la utilización de la espectrometría de masas elemental como sistema de detección para proteínas, dado que esta técnica puede proporcionar límites de detección muy bajos. Además, otra característica muy destacable es la posibilidad de llevar a cabo el análisis con dilución isotópica utilizando el reactivo con isótopos enriquecidos de mercurio, lo que puede mejorar notoriamente la exactitud de los resultados. Para la optimización del método se investigaron parámetros que pueden afectar a la formación del bioconjugado, como son el tiempo de reacción y el exceso de agente reactivo derivatizante. Tras una etapa de limpieza de las proteínas derivatizadas, se investigó la estequiometria mediante técnicas de espectrometría de masas molecular, como el electrospray. Se encontró que el Agente derivatizante reaccionó únicamente con los sitios de enlace sospechados, es decir, las cisteínas libres. Estos sitios de enlace quedaron claramente identificados mediante un análisis MS/MS. En la segunda parte de la tesis se aplicaron diferentes protocolos para la separación de proteínas, con el fin de comprobar la aplicabilidad general del proceso de marcaje y para demostrar el potencial de la detección mediante fuente de plasma con acoplamiento inductivo (ICP) en combinación con la dilución isotópica específica al compuesto de marcaje con mercurio enriquecido en el isótopo 199. Una caracterización posterior indicó que no hay diferencias entre los productos formados con el compuesto adquirido comercialmente y los forma…
abstract: En la presente tesis doctoral se desarrollaron nuevas metodologías para el análisis cuantitativo de proteínas basadas en la introducción química de un compuesto de mercurio capaz de unirse a las cisteínas libres de estas biomoléculas. El ácido hidroximercuribenzoico tiene un alto potencial como agente derivatizante, ya que es capaz de actuar de forma selectiva y completa sobre los residuos de cisteína presentes en las proteínas. El objetivo fundamental del proyecto ha sido la utilización de la espectrometría de masas elemental como sistema de detección para proteínas, dado que esta técnica puede proporcionar límites de detección muy bajos. Además, otra característica muy destacable es la posibilidad de llevar a cabo el análisis con dilución isotópica utilizando el reactivo con isótopos enriquecidos de mercurio, lo que puede mejorar notoriamente la exactitud de los resultados. Para la optimización del método se investigaron parámetros que pueden afectar a la formación del bioconjugado, como son el tiempo de reacción y el exceso de agente reactivo derivatizante. Tras una etapa de limpieza de las proteínas derivatizadas, se investigó la estequiometria mediante técnicas de espectrometría de masas molecular, como el electrospray. Se encontró que el Agente derivatizante reaccionó únicamente con los sitios de enlace sospechados, es decir, las cisteínas libres. Estos sitios de enlace quedaron claramente identificados mediante un análisis MS/MS. En la segunda parte de la tesis se aplicaron diferentes protocolos para la separación de proteínas, con el fin de comprobar la aplicabilidad general del proceso de marcaje y para demostrar el potencial de la detección mediante fuente de plasma con acoplamiento inductivo (ICP) en combinación con la dilución isotópica específica al compuesto de marcaje con mercurio enriquecido en el isótopo 199. Una caracterización posterior indicó que no hay diferencias entre los productos formados con el compuesto adquirido comercialmente y los forma…
author: Kutscher, Daniel Jurgen
language: spa
license: http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es/
date published: 2011-11-28
date modified: 2026-07-24T03:41:45Z
provider: Universidad de Oviedo
publisher: Networked Digital Library of Theses and Dissertations
type: WebPage
source organization: Universidad de Oviedo

PropertyValue
property ID: Handle
value: http://hdl.handle.net/10651/12910