Régulation de l'expression du gène Gja1 impliqué dans la formation de jonctions communicantes au niveau du testicules de souris

Dans le testicule adulte, les cellules de Leydig sont les principales productrices d’androgènes, comme la testostérone, tandis que les cellules de Sertoli protègent, nourrissent et assurent le bon développement des cellules germinales en spermatozoïdes.La communication cellulaire par jonctions communicantes permet aux cellules avoisinantes de s’échanger des molécules de signalisation et des nutriments. Dans le testicule, de telles jonctionssont retrouvées entre les cellules de Leydig, entre les cellules de Sertoli ainsi qu’entre les cellules germinales et les cellules de Sertoli. Par ailleurs, ces jonctions sont formées de connexines, des protéines transmembranaires. Parmi celles retrouvées dans le testicule,la connexine 43 (Cx43), encodée par le gène Gja1, est la plus importante,car son inactivation chez la souris mâle cause une réduction de la production de spermatozoïdes menant à l’infertilité. De plus, le taux d'expression de Gja1 dans les cellules de Leydig et de Sertoli corrèle positivement avec celuides facteurs de transcription Sox.Le promoteur Gja1 contient des éléments de régulation conservés entre espèces pour les facteurs Sox et les membres AP-1, capables d’interagir physiquement avec les Sox. Ainsi, l’étude de l’implication des facteurs Sox et AP-1 dans la régulation de l’expression du gène Gja1 dans le testicule est d’intérêt. Pour ce faire, l’effet des facteurs Sox et AP-1 sur l’activité du promoteur Gja1 fut étudié chez des lignées cellulaires de Leydig (TM3) et de Sertoli (TM4). L’expression de Gja1 puis des facteurs Sox et AP-1 fut confirmée chez les TM3 et les TM4 par Western Blot. Encore dans les TM3 et les TM4, l’activité du promoteur Gja1 fut mesurée par cotransfections de plasmides d’expression pour lesfacteurs Sox (Sox4, Sox8 e tSox9) ainsi qu’AP-1(cJun et cFos) avec des 5 plasmides rapporteurs de la luciférase portant différentes longueurs du promoteur Gja1. Enfin, le recrutement des facteurs de transcription à leurs éléments de régulation sur le promoteur Gja1 fut mesuré par immunoprécipitation de la chromatine (ChIP). Des facteurs Sox et AP-1 transfectés, seulement cJun, JunB et Fra2 engendrent une augmentation de l’activité du promoteur Gja1 chez les TM3.Or, parmi les Sox et les AP-1,certains d’eux peuvent interagir ensemble pour augmenter l’activité du promoteur Gja1. En effet, cJun coopère avec les facteurs Sox8, Sox9 et cFos chez les TM3 et les TM4, ainsi qu’avec Sox4 uniquement chez les TM3. L’identification des éléments de régulation sur le promoteur Gja1, nécessaires aux coopérations mentionnées ci-dessus, a révélé l’importance d’une région située entre -132 et -26 paire de base (pb) du site d’initiation de la transcription. Le recrutement de cFos fut confirmé à cette région par ChIP. Pour cJun, Sox8 et Sox9 cela fut tenté, mais sans succès et nécessitera une autre méthode de confirmation. En somme, dans les cellules de Leydig et de Sertoli, les coopérations entre cJun et cFos et celles entre cJun et Sox8 ou Sox9 permettent de réguler l’expression de Gja1. Cette régulation nécessite une région proximale sur le promoteur Gja1 située entre -132 et -26 pb et implique le recrutement de cFos. Ainsi, ces résultats offrent une meilleure compréhension de la régulation de l’expression de Gja1 dans le testicule et des causes d’infertilité liées à des défauts de son expression.

Name thesis:degree_name

Maîtrise ès sciences (biologie)

Level thesis:degree_level

2e cycle

Discipline thesis:degree_discipline

Faculté des sciences

Grantor dc:publisher

Université de Moncton,

Year dc:date.issued

2017

Author dc:creator

• Ghouili, Firas

Advisor dc:contributor.advisor

• Martin, Luc J.

• Jonctions communicantes (Biologie cellulaire)
• Cellules interstitielles du testicule
• Cellules de Sertoli
• Connexines
• Spermatogenèse chez les animaux
• Régulation
• Protéines de transport membranaire
• Gènes
• Facteurs de transcription

Statement dc:rights

• Author

Language dc:language.iso

iso639-2b, fre

Dc Identifier Other

umir:1943

OAI identifier oai:identifier

oai:umoncton.scholaris.ca:20.500.14658/7365