{"id":{"repo_id":"javeriana","oai_identifier":"oai:repository.javeriana.edu.co:10554/62098"},"canonical_url":"https://search.dev.ndltd.org/etd/javeriana/oai:repository.javeriana.edu.co:10554/62098","repository":{"repo_id":"javeriana","name":"Pontificia Universidad Javeriana","base_url":"https://repository.javeriana.edu.co/oai/request"},"display":{"title":"Evaluación de la respuesta del TGF-beta y los linfocitos t residentes de memoria intestinales y esplénicos durante la infección por rotavirus en un modelo múrido","abstract":"El rotavirus (RV) es uno de los principales agentes causales de gastroenteritis aguda infantil. Para el año 2015 la infección por rotavirus generó el 29.3% de todas las muertes por diarrea en niños menores de 5 años. Las características de la respuesta inmune protectora inducida contra el rotavirus no se conocen en detalle. Existe desconocimiento de dos componentes inmunológicos importantes: el papel del Factor de crecimiento transformante β (TGFβ) y el de los linfocitos T residentes de memoria (LTrm). En el presente trabajo se evaluaron estos dos componentes durante la infección por rotavirus en ratones. Para cumplir nuestro primer objetivo, ratones C57BL/6 neonatos fueron inoculados con mock (control negativo) o con rotavirus homólogo (RV-EC) o heterólogo (RRV). A los días 2, 4, 6, 8 y 12 post-infección (PI) se evaluaron los niveles de mRNA del gen TGFβ en bazo e intestino delgado y los niveles de proteína de TGFβ1 en el contenido intestinal y el suero. Los resultados sugieren que los ratones neonatos infectados con RRV y RV-EC presentan cambios en la expresión del mRNA de tgfb1 y/o de la proteína TGFβ1 a nivel sistémico e intestinal a diferentes días PI. Nuestro segundo objetivo buscó evaluar la frecuencia y el fenotipo de los linfocitos T residentes de memoria intestinales (LTrmi) y esplénicos, totales y específicos de RV, en ratones infectados con el RRV. Inicialmente, se usaron ratones C57BL/6 adultos para estandarizar el aislamiento y tinción de LTrm de bazo e intestino delgado. Posteriormente, ratones C57BL/6 adultos fueron inoculados con 10_7 UFF de RRV o mock. A los 7 días post-infección (DPI) se realizó una tinción intravascular (IV) usando un anticuerpo anti-CD45.2 (marcador presente en todos los leucocitos), se practicó eutanasia y se extrajo una muestra de sangre, el bazo y el intestino delgado. Las células extraídas de estos órganos se tiñeron con marcadores de superficie y tetrámeros específicos de rotavirus y se analizaron por citometría espectral. Así, se describió el fenotipo y la frecuencia de los LTrm (totales y específicos de RRV) y se analizaron los marcadores de importancia para el desarrollo, regulación y mantenimiento de este subconjunto de linfocitos T (LT) en ratones adultos control (bazo, linfocitos de lámina propia (LPL) y linfocitos intraepiteliales (IEL) de intestino delgado) e infectados con RRV (bazo).Se identificó que al día 7 PI los LT IV (CD45.2+) circulantes aislados de bazo CD8+ específicos de RV fueron probablemente activados en intestino y presentan principalmente un fenotipo de LT efectores de corta vida (SLEC), a diferencia de los LT no IV (CD45.2-) residentes con una mayor diferenciación hacía LT precursores de memoria (MPEC). Nuestro siguiente objetivo, contemplado en un nuevo proyecto en curso, es evaluar el papel del TGF-Beta en la generación de los LTrmi.","abstract_html":"El rotavirus (RV) es uno de los principales agentes causales de gastroenteritis aguda infantil. Para el año 2015 la infección por rotavirus generó el 29.3% de todas las muertes por diarrea en niños menores de 5 años. Las características de la respuesta inmune protectora inducida contra el rotavirus no se conocen en detalle. Existe desconocimiento de dos componentes inmunológicos importantes: el papel del Factor de crecimiento transformante β (TGFβ) y el de los linfocitos T residentes de memoria (LTrm). En el presente trabajo se evaluaron estos dos componentes durante la infección por rotavirus en ratones. Para cumplir nuestro primer objetivo, ratones C57BL/6 neonatos fueron inoculados con mock (control negativo) o con rotavirus homólogo (RV-EC) o heterólogo (RRV). A los días 2, 4, 6, 8 y 12 post-infección (PI) se evaluaron los niveles de mRNA del gen TGFβ en bazo e intestino delgado y los niveles de proteína de TGFβ1 en el contenido intestinal y el suero. Los resultados sugieren que los ratones neonatos infectados con RRV y RV-EC presentan cambios en la expresión del mRNA de tgfb1 y/o de la proteína TGFβ1 a nivel sistémico e intestinal a diferentes días PI. Nuestro segundo objetivo buscó evaluar la frecuencia y el fenotipo de los linfocitos T residentes de memoria intestinales (LTrmi) y esplénicos, totales y específicos de RV, en ratones infectados con el RRV. Inicialmente, se usaron ratones C57BL/6 adultos para estandarizar el aislamiento y tinción de LTrm de bazo e intestino delgado. Posteriormente, ratones C57BL/6 adultos fueron inoculados con 10_7 UFF de RRV o mock. A los 7 días post-infección (DPI) se realizó una tinción intravascular (IV) usando un anticuerpo anti-CD45.2 (marcador presente en todos los leucocitos), se practicó eutanasia y se extrajo una muestra de sangre, el bazo y el intestino delgado. 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