Molecular Analysis of the Unconventional Export Machinery of Galectin-1, a beta-Galactoside-specific Lectin of the Extracellular Matrix
type: CreativeWork
description: Galectin-1 ist ein β-Galaktosid-spezifisches Lektin der extrazellulären Matrix, das an der Regulation verschiedener zellulärer Prozesse wie Zellproliferation, Differenzierung und Apoptose beteiligt ist. Das extrazelluläre Auftreten von Galectin-1 war zunächst eine überraschende Entdeckung, da das Protein kein Signalpeptid enthält und somit nicht über ER/Golgi-vermittelten Transport sezerniert werden kann. Darüber hinaus ist die Sekretion von Galectin-1 in Gegenwart von Brefeldin A nicht gehemmt, so dass ein unkonventioneller Sekretionsweg postuliert wurde. In der vorliegenden Dissertation wurde ein robustes in vivo Modell zur funk¬tionellen Rekonstitution der Galectin-1 Sekretion etabliert. Es wurden mittels retroviraler Transduktion stabile Zelllinien generiert, die verschiedene Galectin-1 Reportermoleküle als GFP Fusionsproteine in Abhängigkeit von der exogenen Zugabe von Doxicyclin exprimieren. Da die exportierte Population über β-Galaktosid-haltige Rezeptoren an Zelloberflächen bindet, konnte die Galectin-1 Sekretionsrate über verschiedene Methoden wie Durchflusszytometrie, konfokale Laserscanmikroskopie sowie biochemische Zelloberflächenbiotinylierung unter verschiedenen experimentellen Bedingungen quantifiziert werden. Die etablierten Modellsysteme wurden einerseits zur funktionellen Charakteri¬sierung eines in dieser Arbeit identifizierten Galectin-1 Rezeptors genutzt und andererseits zur Analyse der molekularen Sortierungsdeterminanten verwendet, die Galectin-1 zur entsprechenden Exportmaschinerie dirigieren. Eine systema¬tische Mutagenese des offenen Leserasters von Galectin-1 ergab hierbei, dass Mutationen, die zu einer Bindungsdefizienz führen, letztlich auch einen Exportdefekt verursachen. Komplementär hierzu konnte gezeigt werden, dass Galectin-1 von Zelllinien, die nicht zur Expression von β-Galaktosid-haltigen Rezeptoren befähigt sind, nicht exportiert wird. Hieraus wurde der Schluss gezogen, dass β-Galaktosid-haltige Zelloberflächenrezeptoren für den…
abstract: Galectin-1 ist ein β-Galaktosid-spezifisches Lektin der extrazellulären Matrix, das an der Regulation verschiedener zellulärer Prozesse wie Zellproliferation, Differenzierung und Apoptose beteiligt ist. Das extrazelluläre Auftreten von Galectin-1 war zunächst eine überraschende Entdeckung, da das Protein kein Signalpeptid enthält und somit nicht über ER/Golgi-vermittelten Transport sezerniert werden kann. Darüber hinaus ist die Sekretion von Galectin-1 in Gegenwart von Brefeldin A nicht gehemmt, so dass ein unkonventioneller Sekretionsweg postuliert wurde. In der vorliegenden Dissertation wurde ein robustes in vivo Modell zur funk¬tionellen Rekonstitution der Galectin-1 Sekretion etabliert. Es wurden mittels retroviraler Transduktion stabile Zelllinien generiert, die verschiedene Galectin-1 Reportermoleküle als GFP Fusionsproteine in Abhängigkeit von der exogenen Zugabe von Doxicyclin exprimieren. Da die exportierte Population über β-Galaktosid-haltige Rezeptoren an Zelloberflächen bindet, konnte die Galectin-1 Sekretionsrate über verschiedene Methoden wie Durchflusszytometrie, konfokale Laserscanmikroskopie sowie biochemische Zelloberflächenbiotinylierung unter verschiedenen experimentellen Bedingungen quantifiziert werden. Die etablierten Modellsysteme wurden einerseits zur funktionellen Charakteri¬sierung eines in dieser Arbeit identifizierten Galectin-1 Rezeptors genutzt und andererseits zur Analyse der molekularen Sortierungsdeterminanten verwendet, die Galectin-1 zur entsprechenden Exportmaschinerie dirigieren. Eine systema¬tische Mutagenese des offenen Leserasters von Galectin-1 ergab hierbei, dass Mutationen, die zu einer Bindungsdefizienz führen, letztlich auch einen Exportdefekt verursachen. Komplementär hierzu konnte gezeigt werden, dass Galectin-1 von Zelllinien, die nicht zur Expression von β-Galaktosid-haltigen Rezeptoren befähigt sind, nicht exportiert wird. Hieraus wurde der Schluss gezogen, dass β-Galaktosid-haltige Zelloberflächenrezeptoren für den…
author: Seelenmeyer, Claudia
date published: 2005-12-12
date modified: 2026-07-24T02:30:19Z
provider: Universität Heidelberg
publisher: Networked Digital Library of Theses and Dissertations
type: WebPage
source organization: Universität Heidelberg