Herstellung und Charakterisierung eines anti-HIV-Inhibitors basierend auf modifiziertem Serum Albumin
type: CreativeWork
description: Humanes (HSA), Bovines, Murines und Porcines Serum Albumin sowie Transferrin, Beta-Galaktosidase und Gluthation-S-Transferase-V3-Protein wurden in dieser Arbeit mit hypochloriger Säure modifiziert. Die Proteine wurden mit HOCl in unterschiedlichen molaren Verhältnissen behandelt und anschließend aufgereinigt. Aufgrund der Eigenschaft, dass HOCl-modifiziertes HSA (molares Verhältnis HSA zu HOCl 1:1000) an das HIV-1 gp120 bindet, wurde es VEBP (Virus Envelope Bindendes Protein) genannt. In einem Synzytien-Test wurde die Wirksamkeit des VEBP gegen HIV-1 überprüft. Zellen, die CD4, CXCR4 und CCR5 exprimieren, wurden mit einem gp160-Expressionsvektor transfiziert und die gp120/gp41-induzierte Synzytienbildung beobachtet. Für die Transfektion wurden zwei Expressionsvektoren für ein X4-tropes und ein R5-tropes gp120 (NL4-3, NL-991) eingesetzt. In den beiden Experimenten zeigte VEBP eine vollständige Inhibition der Synzytienbildung bei 20 mg/ml (X4-gp120) bzw. 50 mg/ml (R5-gp120). Es ergab sich aus den Versuchen eine EC50 von circa 10 mg/ml (150 nM) bzw. eine EC50 von circa 25 mg/ml (370 nM) für das X4-trope bzw. R5-trope gp120. In einem HIV-1-Infektionsversuch (500 TCID50 je Virus) zeigte VEBP vollständige Inhibition der Virus-induzierten Synzytienbildung. Es ergab sich eine EC50 von etwa 3 mg/ml (44 nM, NL4-3) und bei einer Konzentration von 20 mg/ml VEBP wurde die Vermehrung des R5-tropen Virus NL-991 um 20% inhibiert. Im weiteren zeigte VEBP bei 13 Virusisolaten der HIV-1 Subtypen A, B, C, D, G, N und O sowie gegen HIV-2 neutralisierende Eigenschaften. Für die Subtypen A (92UG029) und O (mvp2171) ergab sich eine EC50 von circa 6 mg/ml, für die Subtypen B (Bal, JR-CSF), D (92UG021), G (RU570) eine EC50 von circa 15 mg/ml, für Subtyp D (ELI) eine EC50 von circa 20 mg/ml, für die Subtypen C (TZ05, 98BR04), D (92UG035), N (YBF30) eine EC50 von 50 mg/ml, für Subtyp O (mvp8161) und CBL20HIV-2 eine EC50 von circa 80 mg/ml. Die breite Wirksamkeit gegen die verschiedenen HIV-1 S…
abstract: Humanes (HSA), Bovines, Murines und Porcines Serum Albumin sowie Transferrin, Beta-Galaktosidase und Gluthation-S-Transferase-V3-Protein wurden in dieser Arbeit mit hypochloriger Säure modifiziert. Die Proteine wurden mit HOCl in unterschiedlichen molaren Verhältnissen behandelt und anschließend aufgereinigt. Aufgrund der Eigenschaft, dass HOCl-modifiziertes HSA (molares Verhältnis HSA zu HOCl 1:1000) an das HIV-1 gp120 bindet, wurde es VEBP (Virus Envelope Bindendes Protein) genannt. In einem Synzytien-Test wurde die Wirksamkeit des VEBP gegen HIV-1 überprüft. Zellen, die CD4, CXCR4 und CCR5 exprimieren, wurden mit einem gp160-Expressionsvektor transfiziert und die gp120/gp41-induzierte Synzytienbildung beobachtet. Für die Transfektion wurden zwei Expressionsvektoren für ein X4-tropes und ein R5-tropes gp120 (NL4-3, NL-991) eingesetzt. In den beiden Experimenten zeigte VEBP eine vollständige Inhibition der Synzytienbildung bei 20 mg/ml (X4-gp120) bzw. 50 mg/ml (R5-gp120). Es ergab sich aus den Versuchen eine EC50 von circa 10 mg/ml (150 nM) bzw. eine EC50 von circa 25 mg/ml (370 nM) für das X4-trope bzw. R5-trope gp120. In einem HIV-1-Infektionsversuch (500 TCID50 je Virus) zeigte VEBP vollständige Inhibition der Virus-induzierten Synzytienbildung. Es ergab sich eine EC50 von etwa 3 mg/ml (44 nM, NL4-3) und bei einer Konzentration von 20 mg/ml VEBP wurde die Vermehrung des R5-tropen Virus NL-991 um 20% inhibiert. Im weiteren zeigte VEBP bei 13 Virusisolaten der HIV-1 Subtypen A, B, C, D, G, N und O sowie gegen HIV-2 neutralisierende Eigenschaften. Für die Subtypen A (92UG029) und O (mvp2171) ergab sich eine EC50 von circa 6 mg/ml, für die Subtypen B (Bal, JR-CSF), D (92UG021), G (RU570) eine EC50 von circa 15 mg/ml, für Subtyp D (ELI) eine EC50 von circa 20 mg/ml, für die Subtypen C (TZ05, 98BR04), D (92UG035), N (YBF30) eine EC50 von 50 mg/ml, für Subtyp O (mvp8161) und CBL20HIV-2 eine EC50 von circa 80 mg/ml. Die breite Wirksamkeit gegen die verschiedenen HIV-1 S…
author: Kirst, Martin
date published: 2005-06-16
date modified: 2026-07-24T02:30:12Z
provider: Universität Heidelberg
publisher: Networked Digital Library of Theses and Dissertations
type: WebPage
source organization: Universität Heidelberg