Herstellung und Charakterisierung eines anti-HIV-Inhibitors basierend auf modifiziertem Serum Albumin
Humanes (HSA), Bovines, Murines und Porcines Serum Albumin sowie Transferrin, Beta-Galaktosidase und Gluthation-S-Transferase-V3-Protein wurden in dieser Arbeit mit hypochloriger Säure modifiziert. Die Proteine wurden mit HOCl in unterschiedlichen molaren Verhältnissen behandelt und anschließend aufgereinigt. Aufgrund der Eigenschaft, dass HOCl-modifiziertes HSA (molares Verhältnis HSA zu HOCl 1:1000) an das HIV-1 gp120 bindet, wurde es VEBP (Virus Envelope Bindendes Protein) genannt. In einem Synzytien-Test wurde die Wirksamkeit des VEBP gegen HIV-1 überprüft. Zellen, die CD4, CXCR4 und CCR5 exprimieren, wurden mit einem gp160-Expressionsvektor transfiziert und die gp120/gp41-induzierte Synzytienbildung beobachtet. Für die Transfektion wurden zwei Expressionsvektoren für ein X4-tropes und ein R5-tropes gp120 (NL4-3, NL-991) eingesetzt. In den beiden Experimenten zeigte VEBP eine vollständige Inhibition der Synzytienbildung bei 20 mg/ml (X4-gp120) bzw. 50 mg/ml (R5-gp120). Es ergab sich aus den Versuchen eine EC50 von circa 10 mg/ml (150 nM) bzw. eine EC50 von circa 25 mg/ml (370 nM) für das X4-trope bzw. R5-trope gp120. In einem HIV-1-Infektionsversuch (500 TCID50 je Virus) zeigte VEBP vollständige Inhibition der Virus-induzierten Synzytienbildung. Es ergab sich eine EC50 von etwa 3 mg/ml (44 nM, NL4-3) und bei einer Konzentration von 20 mg/ml VEBP wurde die Vermehrung des R5-tropen Virus NL-991 um 20% inhibiert. Im weiteren zeigte VEBP bei 13 Virusisolaten der HIV-1 Subtypen A, B, C, D, G, N und O sowie gegen HIV-2 neutralisierende Eigenschaften. Für die Subtypen A (92UG029) und O (mvp2171) ergab sich eine EC50 von circa 6 mg/ml, für die Subtypen B (Bal, JR-CSF), D (92UG021), G (RU570) eine EC50 von circa 15 mg/ml, für Subtyp D (ELI) eine EC50 von circa 20 mg/ml, für die Subtypen C (TZ05, 98BR04), D (92UG035), N (YBF30) eine EC50 von 50 mg/ml, für Subtyp O (mvp8161) und CBL20HIV-2 eine EC50 von circa 80 mg/ml. Die breite Wirksamkeit gegen die verschiedenen HIV-1 Subtypen und die einfache und günstige Herstellung machen VEBP zu einer aussichtsreichen antiviralen Substanz für den Einsatz als topisches Mikrobizid. Die Inhibition der Interaktion zwischen gp120 und den zellulären Rezeptoren aufgrund der Bindung von VEBP an gp120 könnte ein neuen Angriffspunkt gegen HIV darstellen.
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