Thema - 1. Herstellung von HPV-16 rekombinanten Pflanzenviren für die Produktion viraler Gene in Leguminosen : 2. Modulation einer HPV-16-DNA-Vakzine
type: CreativeWork
description: Im ersten Teil dieser Arbeit wurde versucht basierend auf einem Pflanzen-Virus-Vektorsystem verschiedene HPV16 rekombinante Viren herzustellen. Als Träger der HPV16-Sequenzen wurde die RNA-2 des Cowpea Mosaic Virus verwendet. Ziel war die billige Herstellungsweise einer anti-HPV16-Vakzine in Pflanzen (Vigna unguiculata) im großen Maßstab. Zu diesem Zweck wurden die HPV16-Gene L1 und E7 in das CPMV-Vektorsystem einkloniert und mit zwei unterschiedlichen Methoden in Pflanzen appliziert. Die ersten Experimente wurden mit der HPV16-rekombinanten cDNA-2 (RNA-2) mittels der mechanischen Inokulation durchgeführt. Mit dieser Methode konnte allerdings nur mit den Kontroll-Konstrukten (cDNA-2, cDNA-2-GFP) eine systemische CPMV-Infektion an Hand der Symptome beobachtet werden. Alle anderen Experimente mit den rekombinanten Konstrukten (HPV16L1) schlugen fehl. Auch ein effektiveres Inokulationssystem (Agrobakterien-Inokulation) resultierte abgesehen von den Kontroll-Konstrukten in keinem positiven Ergebnis. Innerhalb der oben beschriebenen Experimente sollte der Einfluss des Pflanzen-Kodon-optimierten HPV16E7 auf die Protein-Expression untersucht werden. Dies konnte allerdings aufgrund der negativen Ergebnisse in den Pflanzen nicht analysiert werden. Aus diesem Grund wurde der Einfluss des „Codon Usage“, allerdings mit den humanisierten HPV16-Genen E7 und L1 in DNA-Immunisierungs-Experimenten weiterverfolgt. Unterschiedlich modifizierte HPV16-DNA-Konstrukte wurden als DNA-Vakzine intramuskulär in Mäuse appliziert und mittels Elispot und Zytotoxizitätstest die zelluläre Immunantwort analysiert. In allen Experimenten konnte gezeigt werden, dass die Humanisierung der HPV16-Gene den größten Einfluss auf die Immunogenität hat und dass die zusätzliche Fusion der Kozak-Sequenz am 5´-Ende der HPV16E7-Sequenzen eher einen geringen Einfluss ausübte. Als Hauptursache für die verbesserte Immunogenität der humanisierten E7-Konstrukte, im Vergleich mit dem unmodifizierten E7-Wild-Typ-Gen, wu…
abstract: Im ersten Teil dieser Arbeit wurde versucht basierend auf einem Pflanzen-Virus-Vektorsystem verschiedene HPV16 rekombinante Viren herzustellen. Als Träger der HPV16-Sequenzen wurde die RNA-2 des Cowpea Mosaic Virus verwendet. Ziel war die billige Herstellungsweise einer anti-HPV16-Vakzine in Pflanzen (Vigna unguiculata) im großen Maßstab. Zu diesem Zweck wurden die HPV16-Gene L1 und E7 in das CPMV-Vektorsystem einkloniert und mit zwei unterschiedlichen Methoden in Pflanzen appliziert. Die ersten Experimente wurden mit der HPV16-rekombinanten cDNA-2 (RNA-2) mittels der mechanischen Inokulation durchgeführt. Mit dieser Methode konnte allerdings nur mit den Kontroll-Konstrukten (cDNA-2, cDNA-2-GFP) eine systemische CPMV-Infektion an Hand der Symptome beobachtet werden. Alle anderen Experimente mit den rekombinanten Konstrukten (HPV16L1) schlugen fehl. Auch ein effektiveres Inokulationssystem (Agrobakterien-Inokulation) resultierte abgesehen von den Kontroll-Konstrukten in keinem positiven Ergebnis. Innerhalb der oben beschriebenen Experimente sollte der Einfluss des Pflanzen-Kodon-optimierten HPV16E7 auf die Protein-Expression untersucht werden. Dies konnte allerdings aufgrund der negativen Ergebnisse in den Pflanzen nicht analysiert werden. Aus diesem Grund wurde der Einfluss des „Codon Usage“, allerdings mit den humanisierten HPV16-Genen E7 und L1 in DNA-Immunisierungs-Experimenten weiterverfolgt. Unterschiedlich modifizierte HPV16-DNA-Konstrukte wurden als DNA-Vakzine intramuskulär in Mäuse appliziert und mittels Elispot und Zytotoxizitätstest die zelluläre Immunantwort analysiert. In allen Experimenten konnte gezeigt werden, dass die Humanisierung der HPV16-Gene den größten Einfluss auf die Immunogenität hat und dass die zusätzliche Fusion der Kozak-Sequenz am 5´-Ende der HPV16E7-Sequenzen eher einen geringen Einfluss ausübte. Als Hauptursache für die verbesserte Immunogenität der humanisierten E7-Konstrukte, im Vergleich mit dem unmodifizierten E7-Wild-Typ-Gen, wu…
author: Steinberg, Thorsten
date published: 2003-11-13
date modified: 2026-07-24T02:29:42Z
provider: Universität Heidelberg
publisher: Networked Digital Library of Theses and Dissertations
type: WebPage
source organization: Universität Heidelberg