Der LC-1-Locus im Mausgenom: ein geeigneter Ort für die stringente Regulation von "Transgenen" via Tetrazyklin ?
type: CreativeWork
description: Systeme zur stringenten Kontrolle der Genexpression sind zur Analyse von Genfunktionen in Säugerzellen und in Modellorganismen von großer Bedeutung. Hier hat sich in den letzten Jahren vor allem das in unserem Labor entwickelte Tet-System durchgesetzt, das auf den Kontrollelementen des Tetrazyklin-Resistenzoperons des Tn10 aus E. coli basiert und die Transkription von Genen mittels Doxyzyklin (Dox) zu kontrollieren erlaubt. Ein zentrales Element in diesem System ist Ptet, ein artifizieller Promotor, der aus einem RNA Polymerase II-Minimalpromotor und einer Reihe von tet-Operator-Sequenzen besteht. Dieser Promotor wird durch ebenfalls artifizielle Transkriptionsaktivatoren (tTA/rtTA) aktiviert, die Dox-abhängig an die tet-Operatoren binden. Durch die zufällige Integration der Ptet-kontrollierten Transkriptionseinheiten bei der Herstellung von transgenen Mauslinien zur konditionalen Genexpression unterliegen die Konstrukte dem Einfluss der genomischen Sequenzen am Integrationsort. Dies führt in nur 5-10% der Fälle zu Linien mit guten Regulationseigenschaften. In solchen Linien ist die Ptet-kontrollierte Transkriptionseinheit in einem genomischen Locus integriert, die wir als „still, aber aktivierbar“ (S/A) benannt haben. In dieser Arbeit wurde die Fragestellung bearbeitet, wie die Herstellung von Tet-regulierten Mauslinien effizienter und reproduzierbarer gestaltet werden kann. Das Problem der Locus-Abhängigkeit nach Integration kann z.B. durch das gezielte Ansteuern von genomischen Loci, die eine regulierte Expression unterstützen, vermieden werden. Eine Alternative ist die Verwendung von großen DNA-Fragmenten, die positionsunabhängig nach genomischer Integration optimale Regulationseigenschaften vermitteln. Da bislang weder solche Konstrukte erhältlich, noch Loci mit S/A-Charakter bekannt sind, war es das Ziel dieser Arbeit, einen entsprechenden genomischen Locus funktional zu identifizieren und als BAC-Fragment zu klonieren. Im ersten Teil dieser Arbeit wurde die M…
abstract: Systeme zur stringenten Kontrolle der Genexpression sind zur Analyse von Genfunktionen in Säugerzellen und in Modellorganismen von großer Bedeutung. Hier hat sich in den letzten Jahren vor allem das in unserem Labor entwickelte Tet-System durchgesetzt, das auf den Kontrollelementen des Tetrazyklin-Resistenzoperons des Tn10 aus E. coli basiert und die Transkription von Genen mittels Doxyzyklin (Dox) zu kontrollieren erlaubt. Ein zentrales Element in diesem System ist Ptet, ein artifizieller Promotor, der aus einem RNA Polymerase II-Minimalpromotor und einer Reihe von tet-Operator-Sequenzen besteht. Dieser Promotor wird durch ebenfalls artifizielle Transkriptionsaktivatoren (tTA/rtTA) aktiviert, die Dox-abhängig an die tet-Operatoren binden. Durch die zufällige Integration der Ptet-kontrollierten Transkriptionseinheiten bei der Herstellung von transgenen Mauslinien zur konditionalen Genexpression unterliegen die Konstrukte dem Einfluss der genomischen Sequenzen am Integrationsort. Dies führt in nur 5-10% der Fälle zu Linien mit guten Regulationseigenschaften. In solchen Linien ist die Ptet-kontrollierte Transkriptionseinheit in einem genomischen Locus integriert, die wir als „still, aber aktivierbar“ (S/A) benannt haben. In dieser Arbeit wurde die Fragestellung bearbeitet, wie die Herstellung von Tet-regulierten Mauslinien effizienter und reproduzierbarer gestaltet werden kann. Das Problem der Locus-Abhängigkeit nach Integration kann z.B. durch das gezielte Ansteuern von genomischen Loci, die eine regulierte Expression unterstützen, vermieden werden. Eine Alternative ist die Verwendung von großen DNA-Fragmenten, die positionsunabhängig nach genomischer Integration optimale Regulationseigenschaften vermitteln. Da bislang weder solche Konstrukte erhältlich, noch Loci mit S/A-Charakter bekannt sind, war es das Ziel dieser Arbeit, einen entsprechenden genomischen Locus funktional zu identifizieren und als BAC-Fragment zu klonieren. Im ersten Teil dieser Arbeit wurde die M…
author: Schönig, Kai
date published: 2003-04-08
date modified: 2026-07-24T02:29:34Z
provider: Universität Heidelberg
publisher: Networked Digital Library of Theses and Dissertations
type: WebPage
source organization: Universität Heidelberg