Die Eigenschaften der Translationsinitiationsregion in E.coli: Effizienz verschiedener Signale aus dem Genom des Bakteriophagen T7

Im Rahmen dieser Dissertation wurden verschiedene Signalelemente, welche die Effizienz prokaryotischer Translationsinitiationsregionen (TIR) bestimmen, untersucht. Die TIR stark exprimierter Gene aus dem Genom des Bakteriophagen T7 weisen alle kurze Shine-Dalgarno (SD) Sequenzen (SD) sowie Unstrukturierte Regionen (USR) mit vorangehendem 5’-hairpin auf. Kurze TIR-Fragmente, die die SD-Sequenz beinhalten, vermittelten nur eine geringe Translationsaktivtät . Durch Verlängerung der Downstreambereiche dieser Fragmente kann die Expression um ein Vielfaches gesteigert werden. Eine Verlängerung der kurzen SD-Sequenzen dreier stark exprimierter T7-Gene konnte den Einfluss von fehlenden Downstreambereichen nur teilweise kompensieren. Eine lange SD-Sequenz war in einigen Fällen sogar nachteilig für die Translationsrate, eine lange SD-Sequenz stellt somit nicht automatisch ein optimales Translationsinitiationssignal dar. Ein 5’-hairpin, der den USR vorausgeht, ist wichtig für eine effiziente Translationsinitiation. Seine Funktion ist vermutlich entweder, die dahinter liegende USR vor der Bildung inhibitorischer Sekundärstrukturen durch Einfaltungen upstream gelegener Sequenzbereiche zu schützen, oder aber Kontakte zu den Ribosomen herzustellen und diesen das Erkennen der Startstelle zu erleichtern. In dieser Arbeit wurde gezeigt, dass der 5’ hairpin der TIR des T7-Gens 11 keinen Abschirmeffekt für die dahinter liegende Ribosomenbindestelle hat. Um festzustellen, ob es zu Interaktionen zwischen hairpin und Ribosomen kommt, die die Translationsinitiation stimulieren, müssten weitere Experimente durchgeführt werden.

Level thesis:degree_level

thesis.doctoral

Grantor dc:publisher

Universität Heidelberg

Year

2003

Author dc:creator

• Kleber, Marcus

Contributors dc:contributor

• Fuchs, Eckart

Repository record source_url

http://www.ub.uni-heidelberg.de/archiv/3406

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oai:archiv.ub.uni-heidelberg.de:3406