Identifizierung und partielle Charakterisierung eines neuen humanen RNA-Bindeproteins, RBP138, und seiner Isoformen

Innerhalb eines North-Western-Expressionsscreens zur Identifizierung zellulärer mit dem RNA-Verpackungssignal Epsilon des Hepatitis-B-Virus interagierender Proteine, wurde aus einer Humanleber-cDNA-Bank eine für ein neues Protein ohne bekanntes RNA-Bindungsmotiv codierende cDNA (NIII-cDNA) isoliert (S.G. Kreft, Diplomarbeit 1996). Im Rahmen der vorliegenden Arbeit wurde die an ihrem 3´-Ende unvollständige NIII-cDNA zunächst komplettiert. Nach Isolierung mit der NIII-cDNA überlappender cDNAs ließen sich zwei Isoformen, RBP138 und RBP35 (=RNA-Bindungsprotein von 138 bzw. 35 kDa), ableiten. Mit dem zu dieser Zeit verfügbaren Working Draft des Humangenoms konnte sowohl das rbp138 Gen auf Chromosom 3 lokalisiert als auch die genomische Sequenz des rbp138 Gens bis zu etwa zwei Dritteln des RBP138-ORF abgeleitet werden. Als für die RNA-Bindung essentielle Region wurde eine K-reiche Domäne identifiziert, die zugleich ein neues RNA-Bindungsmotiv darstellt. Die mRNAs beider Proteine waren in sämtlichen untersuchten Geweben nur sehr niedrig exprimiert. Der Nachweis von endogenem RBP138 gelang in der Hepatomazellinie Huh7 nur nach vorausgegangener Immunpräzipitation. In Lokalisationsstudien wurde für beide Isoformen eine cytoplasmatische, vorwiegend perinukleäre Verteilung beobachtet, die eine Assoziation mit intrazellulären Membranen oder Cytoskelettstrukturen nahelegte. Aufgrund der anhaltenden Unlöslichkeit der Proteine konnte eine solche Assoziation in biochemischen Untersuchungen aber bisher noch nicht bestätigt werden. Das Auftreten einer potenziellen Protein-Protein-Interaktionsdomäne (RING-H2-Domäne) innerhalb von RBP138 läßt eine Interaktion mit weiteren zellulären Proteinen als wahrscheinlich erscheinen. Die Ergebnisse zusammengenommen, stellt RBP138 ein neues humanes RNA-Bindungsprotein mit einer neuen RNA-Bindungsdomäne dar, welches möglicherweise an cytoplasmatischen mRNA-Transport- oder Lokalisationsprozessen beteiligt ist.

Level thesis:degree_level

thesis.doctoral

Grantor dc:publisher

Universität Heidelberg

Year

2000

Author dc:creator

• Kreft, Stefan Günther

Contributors dc:contributor

• Nassal, Michael

Repository record source_url

http://www.ub.uni-heidelberg.de/archiv/1605

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