Konstruktion und Screening von Antikörperbibliotheken gegen Oberflächenantigene

Die Phagedisplaytechnologie ist in den letzten Jahren eine der wichtigsten Methoden zur Gewinnung von humanen monoklonalen Antikörpern geworden. Die Herstellung von großen Antikörperbibliotheken mit Hilfe dieser Technik ist Voraussetzung für die erfolgreiche Selektion von Antikörpern gegen die unterschiedlichsten Antigene. Ziel der vorliegenden Arbeit war es sowohl große Antikörperbibliotheken erfolgreich Antikörper gegen Oberflächenantigene zu selektionieren, als auch die Methoden zu deren Bau zu verfeinern. Aus einer bestehenden Antikörperbibliothek, die aus den peripheren Blutlymphozyten von fünfzig Spendern aufgebaut worden war, wurden scFv-Fragmente gegen das HbsAg des HBV-Viruses isoliert. Die Fragmente erkennen sowohl rekombinant hergestelltes HbsAg, als auch natives auf dem Virus selbst. Diese scFv-Fragmente werden zudem in besonders großen Mengen in E.coli produziert, so daß das Framework für den Aufbau einer synthetischen Bibliothek geeignet ist. Mit einem neuen sensitiveren Phagen-ELISA auf Chemolumineszenzbasis wurden die Detektionsgrenze nach unten verschoben. Dadurch ist es möglich bereits 106 gebundene Phagen zu detektieren. Dieses Verfahren ist besonders sinnvoll einzusetzen, wenn nicht genügend Antikörper oder Antigen vorhanden ist und hat großes diagnostisches Potential bei gering exprimierten Zelloberflächenantigenen. Durch verschiedene methodische Änderungen bei der Amplifikation der humanen variablen Genregionen und bei der Herstellung von Phagedisplaybibliotheken gelang es, die Qualität solcher Bibliotheken zu steigern. Außerdem wurden durch umfangreiche Primerspezifitätstests die Grundlagen für klassenspezifische Patientenbibliotheken gelegt. Desweiteren wurde unter Verwendung von neu entworfenen Primern eine universelle IgM Bibliothek hergestellt und diese erfolgreich mit einem Zelloberflächenantigen (Egp2) gescreent.

Level thesis:degree_level

thesis.doctoral

Grantor dc:publisher

Universität Heidelberg

Year

2000

Author dc:creator

• Kürschner, Timo

Contributors dc:contributor

• Little, Pro.Melvyn

Repository record source_url

http://www.ub.uni-heidelberg.de/archiv/1395

OAI identifier oai:identifier

oai:archiv.ub.uni-heidelberg.de:1395