Etablierung und Charakterisierung einer Tetracyclin-induzierbaren PHD2-Knockdown-HeLa-Zelllinie
type: CreativeWork
description: Prolyl-4-Hydroxylase-Domäne-Proteine 1-3 (PHD1-3) sind sauerstoffabhängige Enzyme, die den Hypoxie-induzierbaren Faktor (HIF-1α) hydroxylieren und damit für den Abbau markieren. HIF-1 ist ein Transkriptionsfaktor, der die Expression von mehr als 70 Genen reguliert, die im weitesten Sinne für die Sauerstoff- und Nährstoffversorgung essentiell sind. Unter Sauerstoffmangel sind die PHDs inaktiv, so dass die HIF-1α-Proteinlevel ansteigen und HIF-1-Zielgene, u. a. das Erythropoietin-Gen, induziert werden. PHD-Inhibitoren werden bereits in Phase-II-Studien getestet. Sie sollen unter anderem zur Therapie der chronischen Anämie bei niereninsuffizienten Patienten eingesetzt werden und die Gabe von rekombinantem EPO ersetzen. Es ist bisher wenig darüber bekannt, ob die PHDs neben der Regulation von HIF-1α noch weitere zelluläre Funktionen beeinflussen. Um HIF-unabhängige PHD-Substrate zu identifizieren und damit auch die Wirkungen und Nebenwirkungen von PHD-Inhibitoren besser einschätzen zu können, wurden Tetracyclin-induzierbare PHD2- und PHD3-Knockdown-Zelllinien etabliert und die Bedingungen für einen möglichst effizienten Knockdown optimiert. Weiterführend wurden die Zelllinien hinsichtlich ihrer Expression von PHD1-3 sowie HIF-1α und dessen Zielgen VEGF (vascular endothelial growth factor) charakterisiert. Im Vergleich zu PHD1 und PHD3 scheint PHD2 unter Normoxie die entscheidende Rolle für die HIF-1α-Regulation zu spielen. Daher wurde die Tetracyclin-induzierbare PHD2-Knockdown-HeLa-Zelllinie 2.1.1-16 genutzt, um PHD2-abhängige Transkriptom- und Proteomveränderungen (Gen-Array und 2D-Gelelektrophorese) zu untersuchen. In der Transkriptomanalyse konnten 7 Gene identifiziert werden, die in Abhängigkeit von dem PHD2-Knockdown unterschiedlich exprimiert werden, jedoch nicht hypoxisch induzierbar sind, d. h. höchstwahrscheinlich nicht durch HIF-1 reguliert werden. Von diesen 7 Genen sind 3 Gene hochreguliert (PGM2L1 (phosphoglucomutase 2 like 1), FAP (fibroblast activation p…
abstract: Prolyl-4-Hydroxylase-Domäne-Proteine 1-3 (PHD1-3) sind sauerstoffabhängige Enzyme, die den Hypoxie-induzierbaren Faktor (HIF-1α) hydroxylieren und damit für den Abbau markieren. HIF-1 ist ein Transkriptionsfaktor, der die Expression von mehr als 70 Genen reguliert, die im weitesten Sinne für die Sauerstoff- und Nährstoffversorgung essentiell sind. Unter Sauerstoffmangel sind die PHDs inaktiv, so dass die HIF-1α-Proteinlevel ansteigen und HIF-1-Zielgene, u. a. das Erythropoietin-Gen, induziert werden. PHD-Inhibitoren werden bereits in Phase-II-Studien getestet. Sie sollen unter anderem zur Therapie der chronischen Anämie bei niereninsuffizienten Patienten eingesetzt werden und die Gabe von rekombinantem EPO ersetzen. Es ist bisher wenig darüber bekannt, ob die PHDs neben der Regulation von HIF-1α noch weitere zelluläre Funktionen beeinflussen. Um HIF-unabhängige PHD-Substrate zu identifizieren und damit auch die Wirkungen und Nebenwirkungen von PHD-Inhibitoren besser einschätzen zu können, wurden Tetracyclin-induzierbare PHD2- und PHD3-Knockdown-Zelllinien etabliert und die Bedingungen für einen möglichst effizienten Knockdown optimiert. Weiterführend wurden die Zelllinien hinsichtlich ihrer Expression von PHD1-3 sowie HIF-1α und dessen Zielgen VEGF (vascular endothelial growth factor) charakterisiert. Im Vergleich zu PHD1 und PHD3 scheint PHD2 unter Normoxie die entscheidende Rolle für die HIF-1α-Regulation zu spielen. Daher wurde die Tetracyclin-induzierbare PHD2-Knockdown-HeLa-Zelllinie 2.1.1-16 genutzt, um PHD2-abhängige Transkriptom- und Proteomveränderungen (Gen-Array und 2D-Gelelektrophorese) zu untersuchen. In der Transkriptomanalyse konnten 7 Gene identifiziert werden, die in Abhängigkeit von dem PHD2-Knockdown unterschiedlich exprimiert werden, jedoch nicht hypoxisch induzierbar sind, d. h. höchstwahrscheinlich nicht durch HIF-1 reguliert werden. Von diesen 7 Genen sind 3 Gene hochreguliert (PGM2L1 (phosphoglucomutase 2 like 1), FAP (fibroblast activation p…
author: Le-Huu, Sinja Kim-Anh
language: ger
keywords: 610 Medizin, Gesundheit, Medicine, PHD Knockdown, HIF, Hypoxie, Cofilin, PHD knock down, hypoxia, 44.37
license: https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/
date published: 2012-04-16T17:23:29Z
date modified: 2026-07-24T02:24:11Z
provider: Georg-August-Universität Göttingen
publisher: Networked Digital Library of Theses and Dissertations
type: WebPage
source organization: Georg-August-Universität Göttingen

PropertyValue
property ID: Handle
value: https://hdl.handle.net/11858/00-1735-0000-0006-AFA9-6

PropertyValue
property ID: DOI
value: 10.53846/goediss-818