Herstellung und Charakterisierung monoklonaler Antikörper gegen die Anaphylatoxin-Rezeptoren
type: CreativeWork
description: Anaphylatoxine sind potente Entzündungsmediatoren, die ihre biologische Wirkung durch eine hochaffine Bindung an spezifische, zelluläre Rezeptoren entfalten. Aufgrund der widersprüchlichen Angaben in der Literatur über die Expression der Anaphylatoxin-Rezeptoren sollten in der vorliegenden Arbeit neue, hochspezifische monoklonale Antikörper gegen den humanen C5aR und erstmals solche Reagenzien gegen den Maus-C3aR hergestellt werden. Mit Hilfe dieser neu generierten monoklonalen Antikörper sollte die Expression sowohl des C5a- als auch des C3a-Rezeptors im normalen und pathologisch veränderten Nierengewebe untersucht werden. Zur Herstellung monoklonaler Antikörper gegen den humanen C5aR wurden RBL-2H3-Transfektanten eingesetzt, die den Rezeptor auf der Oberfläche exprimieren. Nach Bestimmung der Rezeptorspezifität wurden acht monoklonale Antikörper identifiziert, die den C5aR immunhistochemisch erkannten. Anhand ihrer Reaktivität gegen zwei unterschiedliche Peptide wurden sie in drei Gruppen eingeteilt, die an verschiedene Epitope der N-terminalen Domäne des C5aR binden. Monoklonale Antikörper aller drei Gruppen ließen eine deutliche C5aR-Expression in Gefrierschnitten der menschlichen Niere erkennen, die allerdings auf Zellen des mononukleär-phagozytären Systems beschränkt blieb. Mono- sowie polyklonale Antikörper, die durch Immunisierung mit C5aR-Peptiden generiert worden waren, hatten in der Vergangenheit eine C5aR-Expression auch in tubulären Zellen der menschlichen Niere nachgewiesen. Dieser Befund konnte in der vorliegenden Arbeit mittels der neu hergestellten monoklonalen Antikörper nicht bestätigt werden. Eine immunzytochemische Untersuchung sowie die RT-PCR-Analyse zum Nachweis von C5aR-mRNA in kultivierten proximal tubulären Zellen der Niere erbrachten ebenfalls keinen Hinweis auf eine C5aR-Expression. Für die Generierung monoklonaler Antikörper gegen den murinen C3aR wurden zunächst stabil transfizierte RBL-2H3 Zellen, die den murinen C3aR exprimieren, her…
abstract: Anaphylatoxine sind potente Entzündungsmediatoren, die ihre biologische Wirkung durch eine hochaffine Bindung an spezifische, zelluläre Rezeptoren entfalten. Aufgrund der widersprüchlichen Angaben in der Literatur über die Expression der Anaphylatoxin-Rezeptoren sollten in der vorliegenden Arbeit neue, hochspezifische monoklonale Antikörper gegen den humanen C5aR und erstmals solche Reagenzien gegen den Maus-C3aR hergestellt werden. Mit Hilfe dieser neu generierten monoklonalen Antikörper sollte die Expression sowohl des C5a- als auch des C3a-Rezeptors im normalen und pathologisch veränderten Nierengewebe untersucht werden. Zur Herstellung monoklonaler Antikörper gegen den humanen C5aR wurden RBL-2H3-Transfektanten eingesetzt, die den Rezeptor auf der Oberfläche exprimieren. Nach Bestimmung der Rezeptorspezifität wurden acht monoklonale Antikörper identifiziert, die den C5aR immunhistochemisch erkannten. Anhand ihrer Reaktivität gegen zwei unterschiedliche Peptide wurden sie in drei Gruppen eingeteilt, die an verschiedene Epitope der N-terminalen Domäne des C5aR binden. Monoklonale Antikörper aller drei Gruppen ließen eine deutliche C5aR-Expression in Gefrierschnitten der menschlichen Niere erkennen, die allerdings auf Zellen des mononukleär-phagozytären Systems beschränkt blieb. Mono- sowie polyklonale Antikörper, die durch Immunisierung mit C5aR-Peptiden generiert worden waren, hatten in der Vergangenheit eine C5aR-Expression auch in tubulären Zellen der menschlichen Niere nachgewiesen. Dieser Befund konnte in der vorliegenden Arbeit mittels der neu hergestellten monoklonalen Antikörper nicht bestätigt werden. Eine immunzytochemische Untersuchung sowie die RT-PCR-Analyse zum Nachweis von C5aR-mRNA in kultivierten proximal tubulären Zellen der Niere erbrachten ebenfalls keinen Hinweis auf eine C5aR-Expression. Für die Generierung monoklonaler Antikörper gegen den murinen C3aR wurden zunächst stabil transfizierte RBL-2H3 Zellen, die den murinen C3aR exprimieren, her…
author: Kiafard, Ziba
language: ger
keywords: 570 Biowissenschaften, Biologie, Biologie, Komplement, Anaphylatoxin-Rezeptor, C5a, C3a, Monoklonale Antikörper, Immunhistochemie, Niere, Complement, Anaphylatoxin receptor, Monoclonal antibody, Immunohistochemistry, Kidney, 42, RA 000: Allgemeine Naturwissenschaften
license: https://webdoc.sub.gwdg.de/diss/copyr_diss.html
date published: 2012-04-16T14:51:05Z
date modified: 2026-07-24T02:24:11Z
provider: Georg-August-Universität Göttingen
publisher: Networked Digital Library of Theses and Dissertations
type: WebPage
source organization: Georg-August-Universität Göttingen

PropertyValue
property ID: Handle
value: https://hdl.handle.net/11858/00-1735-0000-0006-ACEF-D

PropertyValue
property ID: DOI
value: 10.53846/goediss-254