Characterization of alternative NADH dehydrogenases in the respiratory chain of Toxoplasma gondii as a novel drug targets
type: CreativeWork
description: Das singuläre Mitochondrium der schnell replizierenden Tachyzoiten von Toxoplasma gondii generiert ein Membranpotential, über dessen Beitrag zum Energiestoffwechsel des Bradyzoiten- oder Ruhestadiums des Parasiten bisher wenig bekannt ist.Die steady state mRNA-Konzentration von 11 nukleär-kodierten Enzymen der Atmungskette wurde durch quantitative Real-Time RT-PCR in Tachyzoiten und Bradyzoiten untersucht. Dabei ließ sich nach Normalisierung mit ß-tubulin kein signifikanter Unterschied hinsichtlich der Transkriptmenge in beiden Stadien feststellen. Für Expressionsversuche wurden die offenen Leserahmen der folgenden Gene des Energiemetabolismus bestimmt und mit Hilfe der RT-PCR überprüft: (i) Alternative NADH Dehydrogenase I und II; (ii) die Flavoprotein Untereinheit der Succinat-Dehydrogenase; (iii) Cytochrom c1; und (iv) die ß-Untereinheit der ATP-Synthase. Diese Gene zeigen höchste Übereinstimmungen zu Orthologen in Plasmodium. Sie sind single-copy, nukleär-kodierte Gene, deren offene Leserahmen von multiplen Introns unterbrochen werden und N-terminale mitochondriale targeting-Sequenzen aufweisen. Die offenen Leserahmen der fünf Gene wurde mit einem C-terminalen Myc-Tag fusioniert und unter Kontrolle eines Tetracyclin-regulierbaren Promoters gebracht. Nach stabiler Transfektion der Plasmidkonstrukte in die TATi-1-Zelllinie von T. gondii und entsprechenden Kolokalisationsstudien, konnte gezeigt werden, dass die kodierten Proteine exprimiert und korrekt in das Mitochondrium transportiert werden. Die Expression und Lokalisation von TgNDH2-I und TgATP-ß wurde durch den Einsatz von Mausantiserum bestätigt, das durch Immunisation mit dem jeweiligen rekombinantem Protein gewonnen worden war. Die Überexpression dieser Proteine zeigt keinen Einfluß auf die Wachstumsrate der Parasiten.Das Genom von T. gondii enthält die typischen Komponenten der Atmungskette. Ein Komplex I (NADH:Q reductase) fehlt jedoch. An seiner Stelle konnten zwei Isoformen einer single-subunit, nicht-p…
abstract: Das singuläre Mitochondrium der schnell replizierenden Tachyzoiten von Toxoplasma gondii generiert ein Membranpotential, über dessen Beitrag zum Energiestoffwechsel des Bradyzoiten- oder Ruhestadiums des Parasiten bisher wenig bekannt ist.Die steady state mRNA-Konzentration von 11 nukleär-kodierten Enzymen der Atmungskette wurde durch quantitative Real-Time RT-PCR in Tachyzoiten und Bradyzoiten untersucht. Dabei ließ sich nach Normalisierung mit ß-tubulin kein signifikanter Unterschied hinsichtlich der Transkriptmenge in beiden Stadien feststellen. Für Expressionsversuche wurden die offenen Leserahmen der folgenden Gene des Energiemetabolismus bestimmt und mit Hilfe der RT-PCR überprüft: (i) Alternative NADH Dehydrogenase I und II; (ii) die Flavoprotein Untereinheit der Succinat-Dehydrogenase; (iii) Cytochrom c1; und (iv) die ß-Untereinheit der ATP-Synthase. Diese Gene zeigen höchste Übereinstimmungen zu Orthologen in Plasmodium. Sie sind single-copy, nukleär-kodierte Gene, deren offene Leserahmen von multiplen Introns unterbrochen werden und N-terminale mitochondriale targeting-Sequenzen aufweisen. Die offenen Leserahmen der fünf Gene wurde mit einem C-terminalen Myc-Tag fusioniert und unter Kontrolle eines Tetracyclin-regulierbaren Promoters gebracht. Nach stabiler Transfektion der Plasmidkonstrukte in die TATi-1-Zelllinie von T. gondii und entsprechenden Kolokalisationsstudien, konnte gezeigt werden, dass die kodierten Proteine exprimiert und korrekt in das Mitochondrium transportiert werden. Die Expression und Lokalisation von TgNDH2-I und TgATP-ß wurde durch den Einsatz von Mausantiserum bestätigt, das durch Immunisation mit dem jeweiligen rekombinantem Protein gewonnen worden war. Die Überexpression dieser Proteine zeigt keinen Einfluß auf die Wachstumsrate der Parasiten.Das Genom von T. gondii enthält die typischen Komponenten der Atmungskette. Ein Komplex I (NADH:Q reductase) fehlt jedoch. An seiner Stelle konnten zwei Isoformen einer single-subunit, nicht-p…
author: Saleh, Ahmad Mahmoud Hasan
language: eng
keywords: 570 Biowissenschaften, Biologie, Biologie, HDQ, oxydierende Phosphorylierung, Drogeziel, oxidative phosphorylation, conditional mutant, drug target, 42.13, 42.30, WUE 200: Stoffwechsel und Biochemie der Mikroorganismen {Mikrobiologie}
license: https://webdoc.sub.gwdg.de/diss/copyr_diss.html
date published: 2012-04-16T14:47:17Z
date modified: 2026-07-24T02:24:11Z
provider: Georg-August-Universität Göttingen
publisher: Networked Digital Library of Theses and Dissertations
type: WebPage
source organization: Georg-August-Universität Göttingen

PropertyValue
property ID: Handle
value: https://hdl.handle.net/11858/00-1735-0000-0006-AC32-4

PropertyValue
property ID: DOI
value: 10.53846/goediss-170