Elektroporation: Eine Methode zur Transfektion von Wirbeltierembryonen
type: CreativeWork
description: Die Änderung des entwicklungsbiologischen Potentials einer Zelle und damit auch die Veränderung ihres Schicksals während der Embryogenese des Vertebratenembryos kann durch gezielte Überexpression morphoregulatorisch wirkender Proteine erreicht werden. Neben viralen Gentransfersystemen bieten sich aufgrund ihrer leichten Handhabung verschiedene auf physikalischen Prinzipien basierende Methoden, wie Lipofektion, Beschuß mit Mikropartikeln sowie die Elektroporation zur Einführung nackter DNA in Gewebestrukturen des Embryos an. Im Rahmen dieser Arbeit wurden verschiedene experimentelle Ansätze etabliert und verfeinert, um mit Hilfe der Elektroporation Gene in verschiedenen Stadien des Hühnerembryos, angefangen vom Beginn der Gastrulation bis hin zum Abschluß der Neurulation überzuexprimieren. Zur Analyse der veränderten Genexpressionsprofile wurde ein abgeändertes Verfahren der In-situ-Hybridisierung, basierend auf PCR generierten Matrizen entwickelt. Durch die Möglichkeit, ektopisch transiente Genexpressionen auch in frühen murinen Entwicklungsstadien zu erziele! n, bietet sich nun die Perspektive, dies zusammen mit der in der Maus etablierten genetischen Manipulationsmöglichkeiten, wie Genverlustmutationen, als kombinat ori-schen Ansatz zur Untersuchung entwicklungsbiologischer Vorgänge einzusetzen. Der zweite Teil der Arbeit beschäftigt sich mit den Musterbildungsprozessen während der Ausbildung der Neuralplatte im Hühnerembryo. Es wurde mit Hilfe von Über-expressionsstudien die Rolle von Geminin, BMP4 und DlX5 in den Muster-bildungsprozessen, die zur Anlage der Neuralplatte und zur Segregation von neuralen und epidermalen Identitäten im Ektoderm führen, untersucht. Es konnte gezeigt werden, daß ektopisch exprimiertes BMP4, ein TGF-o Faktor in der Lage ist, in allen drei Keimblättern den epidermalen Marker MSX1 auf transkriptioneller und transla-tioneller Ebene anzuschalten. Die Überexpression von Geminin führte zur Transkription des Homeoboxgens MSX1 jedoch nicht zu…
abstract: Die Änderung des entwicklungsbiologischen Potentials einer Zelle und damit auch die Veränderung ihres Schicksals während der Embryogenese des Vertebratenembryos kann durch gezielte Überexpression morphoregulatorisch wirkender Proteine erreicht werden. Neben viralen Gentransfersystemen bieten sich aufgrund ihrer leichten Handhabung verschiedene auf physikalischen Prinzipien basierende Methoden, wie Lipofektion, Beschuß mit Mikropartikeln sowie die Elektroporation zur Einführung nackter DNA in Gewebestrukturen des Embryos an. Im Rahmen dieser Arbeit wurden verschiedene experimentelle Ansätze etabliert und verfeinert, um mit Hilfe der Elektroporation Gene in verschiedenen Stadien des Hühnerembryos, angefangen vom Beginn der Gastrulation bis hin zum Abschluß der Neurulation überzuexprimieren. Zur Analyse der veränderten Genexpressionsprofile wurde ein abgeändertes Verfahren der In-situ-Hybridisierung, basierend auf PCR generierten Matrizen entwickelt. Durch die Möglichkeit, ektopisch transiente Genexpressionen auch in frühen murinen Entwicklungsstadien zu erziele! n, bietet sich nun die Perspektive, dies zusammen mit der in der Maus etablierten genetischen Manipulationsmöglichkeiten, wie Genverlustmutationen, als kombinat ori-schen Ansatz zur Untersuchung entwicklungsbiologischer Vorgänge einzusetzen. Der zweite Teil der Arbeit beschäftigt sich mit den Musterbildungsprozessen während der Ausbildung der Neuralplatte im Hühnerembryo. Es wurde mit Hilfe von Über-expressionsstudien die Rolle von Geminin, BMP4 und DlX5 in den Muster-bildungsprozessen, die zur Anlage der Neuralplatte und zur Segregation von neuralen und epidermalen Identitäten im Ektoderm führen, untersucht. Es konnte gezeigt werden, daß ektopisch exprimiertes BMP4, ein TGF-o Faktor in der Lage ist, in allen drei Keimblättern den epidermalen Marker MSX1 auf transkriptioneller und transla-tioneller Ebene anzuschalten. Die Überexpression von Geminin führte zur Transkription des Homeoboxgens MSX1 jedoch nicht zu…
author: Vukovich, Wolfgang
language: ger
keywords: 570 Biowissenschaften, Biologie, Biologie, Elektroporation, Transfektion, Wirbeltierembryo, Electroporation, Transfection, vertebrate embryo, 42.23, WKF300
license: https://webdoc.sub.gwdg.de/diss/copyrdiss.htm
date published: 2012-04-16T14:47:04Z
date modified: 2026-07-24T02:24:11Z
provider: Georg-August-Universität Göttingen
publisher: Networked Digital Library of Theses and Dissertations
type: WebPage
source organization: Georg-August-Universität Göttingen

PropertyValue
property ID: Handle
value: https://hdl.handle.net/11858/00-1735-0000-0006-AC17-2

PropertyValue
property ID: DOI
value: 10.53846/goediss-141